腐敗梭菌α毒素基因克隆和表達的研究.pdf

1、河北師范大學(xué)碩士學(xué)位論文腐敗梭菌α毒素基因克隆和表達的研究姓名：張燕申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：趙寶華柳增善20060501河北師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要腐敗梭菌(c，哪湖獅lJ印出肼f)是巴斯德在1877年培養(yǎng)的第一個厭氧致病微生物。它可引起多種動物疾病，如羊快疫、羊的惡性循環(huán)性水腫、雞和火雞的壞疽性皮炎，對牛、豬、鹿等動物的感染也有相關(guān)報道。腐敗梭菌引起的疾病發(fā)病快、死亡率高，對畜禽養(yǎng)殖業(yè)有極大危害。本文采用普通的培養(yǎng)基和

2、厭氧培養(yǎng)方法分離并鑒定了專性厭氧菌腐敗梭菌，暫定名為HeBOl株。并以其基因組為模板擴增出u毒素基因片段連接到克隆載體pUcmTvector中，對目的片段a毒素基因進行了序列測定和同源性分析，序列分析結(jié)果表明：擴增的HeB01菌株的a毒素基因與Gellebank公布的4個參考毒株AB08346、AB08347、AB08348和AB08349的a毒素基因的核苷酸同源性為995％、997％、996％和996％，說明cl毒素基因是十分保守的。

3、然后將Ⅱ毒素基因定向克隆于原核表達載體pQE30中，構(gòu)建了重組質(zhì)粒pQE30一0【，轉(zhuǎn)化受體菌M15，得到了重組菌株M15(pQE30—a)，該菌株經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后，sDsPAGE分析可見其表達的48ku特異蛋白條帶。ELIsA和wjstemblot檢測說明表達的Ⅱ毒素蛋白具有較好的反應(yīng)原性。將表達的a毒素蛋白制成疫苗，免疫小鼠后，具有一定的保護能力。表明該重組菌株有望作為腐敗梭菌基因工程類毒素疫苗的候選生產(chǎn)菌株。關(guān)鍵詞羊快疫；厭氧培養(yǎng)