血管緊張素Ⅱ?qū)υ錾择：鄢衫w維細(xì)胞的活化作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景 增生性瘢痕(hypertrophic scar，HS)是人類(lèi)皮膚損傷后特有的一種病理現(xiàn)象，影響患者的外觀和功能，其發(fā)病機(jī)制至今尚不十分清楚。皮膚組織中成纖維細(xì)胞占細(xì)胞總量的40％-60％，在促纖維化生長(zhǎng)因子的影響下，成纖維細(xì)胞大量分泌細(xì)胞外基質(zhì)，被認(rèn)為是病理性瘢痕形成的主要原因。有研究顯示，皮膚存在局部腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin system，RAs)，血管緊張素Ⅱ(angiotensin Ⅱ

2、，Ang Ⅱ)作為RAS的主要效應(yīng)因子，能夠促進(jìn)人類(lèi)皮膚成纖維細(xì)胞的增殖和膠原合成，提示Ang ⅡI與人類(lèi)瘢痕的形成有關(guān)。Ang Ⅱ的Ⅰ型受體拮抗劑已經(jīng)在臨床上使用，主要用于治療高血壓，有研究人員嘗試用于治療心肌肥厚、肝纖維化等取得了一定的效果。深入研究Ang Ⅱ?qū)S的作用及可能的機(jī)制，將為探索HS的發(fā)生機(jī)制和防治提供新的思路和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 目的 比較Ang Ⅱ的Ⅰ型受體(angiotensin Ⅱ receptor t

3、ype Ⅰ，AT1)和Ⅱ型受體(angiotensinⅡreceptor type Ⅱ，AT2)在正常皮膚(normal skin，NS)與HS組織中的表達(dá)差異，體外分離培養(yǎng)NS和HS的成纖維細(xì)胞，檢測(cè)兩種受體在成纖維細(xì)胞上的表達(dá)情況；觀察AngⅡ、AT1拮抗劑Losartan和AT2拮抗劑PDl23319對(duì)體外培養(yǎng)的HS成纖維細(xì)胞增殖、活化、細(xì)胞外基質(zhì)合成和TGF-β1表達(dá)的影響；檢測(cè)Ang Ⅱ?qū)AK2/STAT1、STAT3通路的

4、活化效應(yīng)以及JAK2拮抗劑對(duì)TGF-β1和FN mRNA表達(dá)的影響。為探討AngⅡ?qū)S成纖維細(xì)胞的活化作用及機(jī)制提供理論依據(jù)。 方法 1．應(yīng)用免疫組化方法觀察Ang Ⅱ的受體AT1和AT2在NS與HS組織中的表達(dá)差異；體外分離培養(yǎng)NS和HS成纖維細(xì)胞，通過(guò)RT-PCR和Western blot檢測(cè)AT1、AT2tuRNA和蛋白在成纖維細(xì)胞上的表達(dá)情況。 2．通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)、MTT法、[<'3>H]>-TdR摻入法

5、測(cè)定細(xì)胞增殖和活力，[<'3>H]-脯氨酸摻入法檢測(cè)AngⅡ?qū)S成纖維細(xì)胞膠原合成的影響。 3．應(yīng)用RT-PCR法和Western blot法分別從mRNA水平和蛋白水平檢測(cè)Ang Ⅱ?qū)Τ衫w維細(xì)胞合成細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分Ⅰ型前膠原、Ⅲ型前膠原和纖維連接蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)以及TGF-β1表達(dá)的影響。 4．檢測(cè)Ang Ⅱ?qū)AK/STAT通路中的JAK2、STAT1、STAT3磷酸化的影響，并進(jìn)一步檢測(cè)磷

6、酸化的STAT1、STAT3轉(zhuǎn)位入核情況。觀察JAK2抑制劑AG490對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞TGF-β1合成的影響。 結(jié)果 1．Ang Ⅱ的受體AT1和AT2在NS組織中的表達(dá)呈陰性或弱陽(yáng)性，在HS中，二者表達(dá)量均增加，且以AT1增加的更加明顯。AT1和AT2的mRNA和蛋白在NS和HS的成纖維細(xì)胞中均有表達(dá)，在HS成纖維細(xì)胞上的表達(dá)量多于NS，AT1的表達(dá)量增加的更加明顯，成纖維細(xì)胞中AT1 mRNA和蛋白表達(dá)量H

7、S分別是NS的3.1倍和2.3倍。 2．AngⅡ通過(guò)與HS成纖維細(xì)胞上的受體AT1結(jié)合，誘導(dǎo)其增殖、活化。 3．Ang Ⅱ能促進(jìn)HS成纖維細(xì)胞合成細(xì)胞外基質(zhì)及TGF-β1，該作用可被其Atl受體拮抗劑Losartan完全阻斷。 4．JAK2的阻滯劑AG490能部分降低Ang Ⅱ刺激后的成纖維細(xì)胞TGF-β1和FNmRNA的表達(dá)。 5．AngⅡ能促進(jìn)JAK2、STAT1和STAT3的磷酸化，以P-STAT3

8、明顯，并促進(jìn)磷酸化的STAT1和STAT3轉(zhuǎn)位入核，提取的細(xì)胞核蛋白中p-STAT3與P-STAT1表達(dá)均增加，尤其以p-STAT3明顯，用Losartan和JAK2的抑制劑AG490分別作預(yù)處理后，均能降低AngⅡ?qū)AK2通路的活化作用。 結(jié)論 1．皮膚是Ang Ⅱ的作用靶器官之一，成纖維細(xì)胞是Ang Ⅱ作用的靶細(xì)胞。 2．Ang Ⅱ誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞增殖、活化、分泌細(xì)胞外基質(zhì)、促進(jìn)TGF-β1的合成，均是通過(guò)其