LPA、GLU、LTF和PLTP基因單核苷酸多態(tài)性與冠心病相關(guān)性研究.pdf

1、冠心病是危害人類健康影響壽命的重要公共衛(wèi)生問題之一。已有大量分子流行病學(xué)和遺傳學(xué)研究顯示，冠心病是一種復(fù)雜的多基因疾病，多種遺傳因素和環(huán)境因素與冠心病有關(guān)，尤其是與脂質(zhì)代謝相關(guān)的多個(gè)基因在冠心病發(fā)生發(fā)展中起重要作用。其中，從2008年至2013年，全基因組關(guān)聯(lián)性研究(genome-wide associationstudies，GWAS)報(bào)道了近200個(gè)與脂代謝相關(guān)位點(diǎn)，得到了豐富的研究成果。
　　本研究根據(jù)GWAS在脂代謝和冠心

2、病中的研究結(jié)果，同時(shí)結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室的前期研究工作，共篩選了脂蛋白a(Lipoprotein(a)， LPA)基因、凝集素(clusterin，GLU)基因、磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(phospholipid transfer protein， PLTP)基因和乳鐵蛋白(lactoferrin，LTF)基因這四個(gè)候選基因進(jìn)行其基因單核苷酸多態(tài)性研究。
　　目的:探討LPA、CLU、PLTP、LTF基因單核苷酸多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性及相關(guān)代謝指標(biāo)的

3、關(guān)系。
　　方法:
　　1、研究對(duì)象
　　(1)非冠心病組:選擇367名冠狀動(dòng)脈造影所示所有冠狀動(dòng)脈主要分支直徑狹窄均不大于25％的人群入選至非冠心病組。
　　(2)冠心病組:選擇496名冠狀動(dòng)脈造影所示至少一支心外膜下冠狀動(dòng)脈主要分支直徑狹窄大于75％的人群入選至冠心病組。
　　2、候選基因和SNPs位點(diǎn)的選擇:本文根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室前期工作的研究成果，同時(shí)結(jié)合GWAS在冠心病中的研究結(jié)果，確定LPA、CLU、

4、PLTP和LTF這四個(gè)候選基因進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性研究。SNPs位點(diǎn)選擇上，首先選取基因功能區(qū)可能對(duì)蛋白質(zhì)水平產(chǎn)生影響的所有SNPs位點(diǎn)，再綜合該位點(diǎn)在中國北方漢族人群中最小等位基因頻率(Minor Allele Frequency，MAF)和文獻(xiàn)檢索對(duì)該位點(diǎn)其他人群驗(yàn)證結(jié)果報(bào)道等進(jìn)行篩選，最終篩選出了10個(gè)有意義的SNPs位點(diǎn)。
　　3、SNPs位點(diǎn)的檢測(cè)方法:使用基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時(shí)間質(zhì)譜分析質(zhì)譜技術(shù)（matrix-as

5、sisted laser desorption/ionization-time of flight,MALDI-TOF）進(jìn)行分型檢測(cè)。
　　4、統(tǒng)計(jì)分析方法:應(yīng)用SPSS20.0軟件對(duì)計(jì)數(shù)資料進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，對(duì)正態(tài)分布的計(jì)量資料進(jìn)行單因素方差分析，對(duì)非正態(tài)分布的計(jì)量資料進(jìn)行秩和檢驗(yàn)，當(dāng)P值小于0.05認(rèn)為具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)果:
　　1、Hardy-Winberg平衡檢驗(yàn):9個(gè)SNPs位點(diǎn)符合H-W平衡。

6、>　　2、冠心病組與非冠心病組間關(guān)聯(lián)分析結(jié)果:
　　(1)組間等位基因頻率的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果:位于LPA基因上的rs3798220位點(diǎn)(C/T)在等位基因頻率方面具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.049)，余位點(diǎn)未見顯著性差異。
　　(2)組間基因型頻率的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果:9個(gè)SNPs位點(diǎn)均未見顯著差異(P＞0.05)。
　　(3)組間基因模型中基因型頻率的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果:顯性模型中LPA基因的rs3798220位點(diǎn)(CC+CT型vs

7、 TT型)具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.043)，余位點(diǎn)未見顯著差異。隱性模型中CLU基因上的rs3216167位點(diǎn)（DEL型vs A.DEL+AA型）在兩組受試者間具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P=0.047，余位點(diǎn)未見顯著性差異(P＞0.05)。
　　(4)單倍體分析:rs3798220和rs1801693位點(diǎn)、rs3216167、rs7982、rs1532278位點(diǎn)之間以及rs378114和rs394643位點(diǎn)之間為連鎖不平衡區(qū)域，各

8、連鎖不平衡區(qū)域均與冠心病不相關(guān)。
　　3、不同基因型間計(jì)量指標(biāo)的比較:
　　(1) LPA基因:rs3798220位點(diǎn)中血清LPA具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.001);rs1801693位點(diǎn)中未見有顯著性差異的血清代謝指標(biāo);rs7765803位點(diǎn)中血清LPA具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0);
　　(2) CLU基因:rs3216167位點(diǎn)中血清LPA和HbA1c具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P值分別為0.032，0.029）;

9、rs7982位點(diǎn)中血清TC、LDL具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P值分別為0.069，0.051）;rs1532278位點(diǎn)中血清TC水平、LDL、APOB具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P值分別為0.048，0.039和0.052）;
　　(3) LTF基因:rs1126477位點(diǎn)血清TG具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.011);
　　(4) PLTP基因:rs378114位點(diǎn)中未見有顯著差異的血清代謝指標(biāo);rs394643位點(diǎn)中血清APOB具

10、有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.011)。
　　4、SNP位點(diǎn)等位基因變化引起冠心病風(fēng)險(xiǎn)變化程度
　　rs3798220位點(diǎn)中，CT+CC型發(fā)生冠心病的風(fēng)險(xiǎn)比TT增加了1.5倍。該位點(diǎn)能夠解釋0.7％的冠心病病因(Nagelkerke R2=0.07)。
　　5、血LPA和冠心病關(guān)系的關(guān)聯(lián)指標(biāo)
　　根據(jù)rs3798220基因型分組，比較基因型-疾病，基因型-血清LPA水平，推導(dǎo)出血清LPA水平和冠心病關(guān)系的關(guān)聯(lián)指標(biāo)O

11、RLPA-CAD=1.503K.14.64，即血清LPA變化K個(gè)單位時(shí)發(fā)生冠心病的效應(yīng)值。
　　結(jié)論:
　　1、LPA基因:rs3798220位點(diǎn)可能通過影響血清LPA水平影響冠心病發(fā)生;rs7765803位點(diǎn)可能影響血LPA水平；
　　2、CLU基因:rs3216167位點(diǎn)可能影響血清LPA水平，并與冠心病發(fā)生相關(guān);rs7982位點(diǎn)可能影響血TC、LDL水平;rs1532278位點(diǎn)可能影響血TC、LDL、APOB水平