阿德福韋混膦酸酯類衍生物的設(shè)計(jì)、合成與生物活性評(píng)價(jià).pdf

1、目的：合成具有較高抗HBV活性與較低腎細(xì)胞毒性的新型阿德福韋衍生物。
　　方法：(1)目標(biāo)化合物合成:N-BocL-氨基酸與H2S在異丁基氯甲酸酯(IBCF)與N-甲基嗎啉(NMM)存在通過(guò)低溫反應(yīng)轉(zhuǎn)化為N-Boc硫代L-氨基酸,所得物與1、2-二溴乙烷與1、3-二溴丙烷在NaH條件下通過(guò)低溫縮合反應(yīng)得到N-Boc硫代L-氨基酸2-溴乙基酯與3-溴丙基酯。以非甾體抗炎藥酮洛芬,氟比洛芬,萘普生與布洛芬為底物通過(guò)其與2-溴乙醇、3-

2、溴-1-丙醇在DMAP/DCC條件下縮合得到非甾體抗炎藥2-溴乙基酯與3-溴丙基酯。獲得的上述結(jié)構(gòu)片段與阿德福韋在N,N′-二環(huán)己基-4-嗎啉基-咪(DCMC)的存在下通過(guò)“一鍋合成法(OnePotSynthesis)”縮合,后經(jīng)85％磷酸脫去N-叔丁氧羰基,結(jié)構(gòu)確證表明所得產(chǎn)物與設(shè)計(jì)目標(biāo)化合物結(jié)構(gòu)一致。(2)目標(biāo)化合物抗HBV活性研究:采用HepG22.2.15細(xì)胞模型進(jìn)行化合物體外抗病毒活性測(cè)試,以半數(shù)有效濃度(EC50),半數(shù)細(xì)胞

3、毒性濃度(CC50)以及作用選擇性指數(shù)(SI)為指標(biāo)評(píng)價(jià)了目標(biāo)化合物抗HBV作用效果。(3)目標(biāo)化合物腎細(xì)胞毒性研究:采用源于正常成年男性腎近端小管上皮細(xì)胞,經(jīng)人乳頭狀瘤病毒(HPV-16)的E6/E7基因轉(zhuǎn)染而永生化的HK-2細(xì)胞株進(jìn)行目標(biāo)化合物腎細(xì)胞毒性測(cè)試,以細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率(%)、細(xì)胞結(jié)構(gòu)損傷(LDH)釋放率以及腎小管結(jié)構(gòu)損傷指標(biāo)(NAG)評(píng)價(jià)了了目標(biāo)化合物腎細(xì)胞毒性。(4)目標(biāo)化合物穩(wěn)定性研究:以37±1℃水浴預(yù)熱的

4、pH2.0及pH7.4的磷酸鹽緩沖溶液為考察環(huán)境,計(jì)算了目標(biāo)化合物在兩種環(huán)境下的降解半衰期(t1/2),評(píng)價(jià)目標(biāo)化合物的體外穩(wěn)定性。
　　結(jié)果：(1)采用“一鍋法”能順利合成目標(biāo)化合物,累計(jì)收率達(dá)到10-15%,所合成的目標(biāo)化合物經(jīng)過(guò)IR,1HNMR,ESI-MS,ESI-HRMS檢測(cè),結(jié)構(gòu)與目標(biāo)化合物一致;(2)抗病毒活性研究發(fā)現(xiàn)目標(biāo)化合物對(duì)HBV-DNA作用的半數(shù)抑制濃度(EC5022.73-50μM),半數(shù)細(xì)胞毒性濃度(CC

5、5070.80-1000μM),該結(jié)果提示:目標(biāo)化合物抗HBV活性與作用選擇性指數(shù)弱于陽(yáng)性對(duì)照,但部分目標(biāo)化合物對(duì)HepG22.2.15細(xì)胞毒性小于陽(yáng)性對(duì)照;(3)HK-2腎細(xì)胞毒性研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)目多數(shù)標(biāo)化合物具有較陽(yáng)性對(duì)照Adefovirdipivoxil更低的腎細(xì)胞毒性,其形態(tài)學(xué)指標(biāo)、AO/EB染色指標(biāo),結(jié)構(gòu)損傷LDH釋放率以及腎小管結(jié)構(gòu)損傷指標(biāo)(NAG)均低于陽(yáng)性對(duì)照;(4)目標(biāo)化合物體外穩(wěn)定性研究發(fā)現(xiàn)該類化合物在pH=2條件下較穩(wěn)