大黃對新生鼠壞死性小腸結(jié)腸炎模型腸損傷防治作用的研究.pdf

1、目的: 壞死性小腸結(jié)腸炎(NEC)是新生兒時(shí)期嚴(yán)重的腸道疾病，也是新生兒尤其是未成熟兒早期死亡的重要原因，且隨著低出生體重兒存活率的增加，NEC的發(fā)病率呈上升趨勢。1964年P(guān)ERSON首次報(bào)道NEC，雖然臨床及基礎(chǔ)對其進(jìn)行了大量研究，但至今對其確切的發(fā)病機(jī)制仍不清楚。NEC是一種復(fù)雜的多因素疾病，目前公認(rèn)的與NEC發(fā)病有關(guān)的因素包括，早產(chǎn)、缺血缺氧、胃腸道喂養(yǎng)、感染及炎癥等，NEC-旦發(fā)生，病情進(jìn)展迅速，預(yù)后不好。手術(shù)切除回腸

2、終端可以導(dǎo)致維生素B12缺乏和貧血，腸切除廣泛引起短腸綜合癥和營養(yǎng)不良，救治不及時(shí)容易導(dǎo)致死亡。目前本病尚無特效的防治手段，因此，積極地做好預(yù)防工作，早期防止病情進(jìn)展顯得尤為重要。大黃是蓼科多年生草本植物，多年來一直用于新生兒黃疸的臨床治療，近年對大黃在胃腸道的作用研究較多，綜合起來主要有瀉下、保護(hù)黏膜屏障、改善胃腸道微循環(huán)、促進(jìn)胃腸道蠕動(dòng)、同時(shí)還能預(yù)防腸道細(xì)菌易位。其效能正好與新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎產(chǎn)生機(jī)制相反，理論上具有防治NEC的

3、作用。 本試驗(yàn)采用新生48小時(shí)的SD大鼠給予缺氧+冷刺激，以胃管注入大黃煎液為陽性對照，生理鹽水組為陰性對照，未給予缺氧+冷刺激者為正常對照組，通過對各組腸組織損傷情況進(jìn)行病理學(xué)評分，客觀評價(jià)大黃對新生鼠壞死性小腸結(jié)腸炎模型腸損傷的保護(hù)作用，同時(shí)，通過對腸組織勻漿中PAF、TNF—α含量的檢測，探討大黃對腸損傷的保護(hù)作用是否與降低腸組織PAF、TNF—α濃度有關(guān)，為應(yīng)用大黃防治新生鼠壞死性小腸結(jié)腸炎提供科學(xué)依據(jù)。 方法:

4、 選用Sprague—Dewley新生2日齡大鼠，雌雄不限，體重5-10g，與母鼠同籠，母乳喂養(yǎng)。往缺氧箱內(nèi)注入100％N2，應(yīng)用測氧儀測得箱內(nèi)氧濃度為0，將NEC組20只新生鼠放入缺氧箱內(nèi)90秒，取出后再將其放入4℃冰箱冷刺激，10分鐘后取出，每天2次，連續(xù)3天。將所有動(dòng)物隨機(jī)分為3組，A組(大黃治療組)：在母乳喂養(yǎng)的同時(shí)每日經(jīng)喂管給予大黃煎液0.2ml，每日兩次，間隔8小時(shí)，連續(xù)三天；B組(生理鹽水對照組)：在母乳喂養(yǎng)的同時(shí)

5、每日經(jīng)喂管給予生理鹽水0.2ml，每日兩次，間隔8小時(shí)，連續(xù)三天；C組(正常對照組)：未進(jìn)行缺氧+冷刺激實(shí)驗(yàn)。每組10只。所有動(dòng)物第五天斷頭處死，取近回盲部腸組織1cm甲醛固定，石蠟包埋，切片及HE染色，進(jìn)行病理學(xué)檢查及腸損傷評分，根據(jù)固有層分離、中性粒細(xì)胞浸潤、絨毛脫落、壞死，血管擴(kuò)張，間質(zhì)水腫，將腸損傷分為0～4級，組織學(xué)評分≥2確定為NEC；剩余腸管放入冷生理鹽水中漂洗、濾紙拭干稱重，加9倍的生理鹽水制成10％的組織勻漿，在4℃低

6、溫離心10000r/min，離心15分鐘后取上清液分裝于3個(gè)EP管中，用于檢測腸組織PAF、TNF—α的OD值以及腸組織中蛋白含量，采用ELISA雙抗夾心法檢測，試劑盒分別購自武漢博士德公司和深圳晶美公司，腸組織PAF、TNF—α含量以每毫克腸組織蛋白中PAF/TNF—α含量表示(pg/mgpro)。體重及腸組織中TNF—α含量比較采用單因素方差分析，組間比較采用Bonferroni，腸組織PAF含量經(jīng)檢驗(yàn)方差不齊，組間檢驗(yàn)用Brown

7、—Forsythe法，組內(nèi)比較采用DunnettT3，病理評分比較應(yīng)用Kruskal—WallisH檢驗(yàn)、兩組發(fā)病率比較采用fisher精確概率法檢驗(yàn)，α=0.05為顯著性檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，腸組織PAF、TNF—a含量與腸損傷程度進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析，采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果: 模型組新生鼠在造模后均出現(xiàn)精神萎糜、活動(dòng)減少、反應(yīng)遲鈍，B組新生鼠在造模后第三天腹脹明顯，活動(dòng)明顯減少，刺激后反應(yīng)差

8、，外觀消瘦，皮下脂肪少，皮膚皺褶多，A組新生鼠腹瀉明顯，為黃色稀便，活動(dòng)度及外觀消瘦程度較B組輕，C組無腹瀉，活動(dòng)好，皮下脂肪豐滿。A、B、C三組新生鼠第5天時(shí)體重分別為12.1±0.434、10.80±0.422、13.140±0.270；體重增加值分別為3.451±0.368、2.103±0.206、4.429±0.404，三組第5天時(shí)體重、體重增加值之間比較均有顯著差異性，F(xiàn)=93.461，F(xiàn)=119.632，P<0.001。腸組

9、織大體標(biāo)本可見A組新生鼠腸管淡黃色，稍暗，腸壁薄，可見腸腔內(nèi)較多小氣泡；B組新生鼠腸管顏色晦暗，腸壁薄，表面偶有小出血點(diǎn)，質(zhì)地脆，易斷裂，腸腔可見較多氣泡；C組新生鼠腸管淡黃色，有光澤，質(zhì)地韌，腸管壁厚。三組腸組織病理切片可見，A組部分上皮絨毛脫落，粘膜下層及肌肉層水腫，B組可見大量的腸絨毛脫落甚至全層壞死，C組上皮絨毛整齊，A、B、C三組病理評分分別為1.3±0.48、2.9±0.57、0.2±0.42，各組之間腸損傷病理評分差別有顯

10、著意義，H=24.870，P<0.001:與B組相比，A組腸損傷降低，但仍高于C組，差異均有顯著意義。A、B兩組NEC發(fā)病率分別為30％(3/7)、90％(9/1)。A、B和C三組腸組織PAF含量分別為13520.98±2427.93、23021.14±2064.85、5628.21±1023.52；TNF—a含量為29.23±4.73、42.30±3.65、16.00±5.02，各組含量差別有顯著意義，與B組相比，A組腸組織中PAF、

11、TNF—a含量顯著降低，但仍高于C組。腸組織PAF、TNF—a含量與腸損傷程度Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示：新生鼠壞死性小腸結(jié)腸炎腸損傷程度與腸組織中TNF—a、PAF含量呈顯著正相關(guān)rTNF—a=0.925、rPAF=0.947、P均<0.001。 結(jié)論:大黃煎液對新生鼠壞死性小腸結(jié)腸炎有非常顯著地防治作用，能明顯減輕缺氧腸組織的損傷程度，下調(diào)炎性細(xì)胞因子水平。大黃煎液治療后能使新生鼠缺氧腸損傷的程度降低，大黃的這種防治