高同型半胱氨酸對高血壓大鼠心肌細(xì)胞GRP78和CHOP的影響與左室肥厚的關(guān)系及依葉片的干預(yù)作用.pdf

1、高同型半胱氨酸血癥(Hyperhomocysteine,HHcy)是指血清中同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)濃度高于10μmol/L。我國學(xué)者將伴有血清Hcy水平升高的原發(fā)性高血壓稱為“H型”高血壓。我國約有1.5億人患“H型”高血壓,其發(fā)病率遠(yuǎn)高于國外。HHcy與高血壓具有協(xié)同危害作用,HHcy加重了高血壓對靶器官的損害。近年臨床研究表明,血清 Hcy的水平與高血壓左室肥厚有密切的關(guān)系,但尚未有確切的證據(jù)顯示血清Hcy

2、水平的升高與高血壓左室肥厚的發(fā)生發(fā)展有直接相關(guān)性。高Hcy的致病途徑復(fù)雜,多種分子機(jī)制包括內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙、血管平滑肌細(xì)胞增生、血小板凝聚、胰島素抵抗、促凝及抗凝機(jī)制失衡等可能參與了冠心病、動脈粥樣硬化、高血壓、腦卒中等相關(guān)心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展,但高Hcy對高血壓左室肥厚影響的分子機(jī)制研究甚少。本課題組以往研究證實(shí),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(Endoplasmic Reticulum Stress,ERS)為高血壓所致左室肥厚的分子機(jī)制之一。多種原

3、因所致外周小動脈收縮,血壓升高,心臟壓力負(fù)荷增加,觸發(fā)心肌細(xì)胞ERS,ERS保護(hù)因子GRP78、GRP94等與應(yīng)激促凋亡因子CHOP、caspase12等表達(dá)失衡,持久劇烈的應(yīng)激導(dǎo)致促凋亡因子表達(dá)占優(yōu)勢,介導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大凋亡,臨床上最終出現(xiàn)左室肥厚。然而,ERS是否為HHcy對高血壓左室肥厚作用的分子機(jī)制之一尚未可知。
　　依那普利葉酸片(簡稱依葉片)是二代血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)與葉酸以10mg/0.8mg配制的新型復(fù)

4、合制劑,臨床上用于治療伴有HHcy的原發(fā)性高血壓患者。依那普利主要通過抑制RAS系統(tǒng)產(chǎn)生降壓作用,葉酸能夠促進(jìn)Hcy甲基化過程,降低血清Hcy。研究表明,依葉片不僅降低血壓及血清 Hcy水平,還能降低相關(guān)心血管不良事件的發(fā)生率。但其對伴 HHcy的高血壓左室肥厚的干預(yù)效果及干預(yù)機(jī)制目前尚不清楚?；谏鲜鲅芯繝顩r,本實(shí)驗(yàn)將采用腹主動脈縮窄術(shù)及高蛋氨酸飲食建立高血壓伴 HHcy大鼠模型,并使用依那普利葉酸片進(jìn)行干預(yù)治療。通過采用一系列的檢測

5、方法以及檢測指標(biāo)來探討HHcy是否加重高血壓左室肥厚以及ERS是否為其致病的分子生物學(xué)機(jī)制之一;依葉片能否有效改善伴有 HHcy的高血壓左室肥厚并探討其作用的分子生物學(xué)機(jī)制。通過本研究以期為“H型”高血壓對靶器官心臟損害的防治提供新的理論依據(jù)及策略,從而降低“H型”高血壓的危害性。
　　研究方法：
　　本研究采用腹主動脈縮窄術(shù)制備高血壓大鼠模型,手術(shù)2周末擇取收縮壓(Systolic blood pressure,SBP)≥

6、140mmHg的高血壓大鼠為研究對象,隨機(jī)分為對照組、高蛋氨酸組和依葉片組,各組又分為4周及8周亞組。通過使用無創(chuàng)大鼠尾動脈血壓測定分析系統(tǒng)測定大鼠SBP;Hcy檢測儀檢測大鼠血清Hcy濃度;稱取大鼠體質(zhì)量、全心質(zhì)量及左心質(zhì)量,計(jì)算左心質(zhì)量/體質(zhì)量及左心質(zhì)量/全心質(zhì)量;HE染色觀察大鼠心肌組織的形態(tài)學(xué)改變;通過Western blot和免疫組化觀察大鼠心肌細(xì)胞GRP78和CHOP表達(dá)的變化。
　　研究結(jié)果：
　?、?周時(shí),高

7、蛋氨酸組大鼠SBP略高于對照組,但兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與高蛋氨酸組相比,依葉片組大鼠 SBP明顯降低(P<0.05)。8周時(shí),高蛋氨酸組SBP明顯高于對照組(P<0.05);與高蛋氨酸組相比,依葉片組大鼠SBP顯著降低(P<0.01)。②隨喂養(yǎng)時(shí)間的增長,高蛋氨酸組大鼠血清 Hcy濃度逐漸增高,而對照組大鼠血清Hcy濃度未見明顯升高,兩組4周、8周亞組間相比有顯著差異(P<0.01);與高蛋氨酸組4周、8周亞組相比,

8、依葉片組相應(yīng)亞組大鼠血清Hcy濃度均顯著降低(P<0.01)。③對照組及高蛋氨酸組4周、8周亞組HWI和LVWI均有明顯增高,且高蛋氨酸組兩亞組HWI和LVWI增高較對照組相應(yīng)亞組更為明顯(P<0.05);與高蛋氨酸組4周、8周亞組相比,依葉片組相應(yīng)亞組HWI和LVWI均明顯降低(P<0.05)。④對照組及高蛋氨酸組大鼠心肌細(xì)胞GRP78表達(dá)隨應(yīng)激時(shí)間的增長而降低,高蛋氨酸組4周、8周亞組大鼠心肌細(xì)胞GRP78表達(dá)均高于對照組相應(yīng)亞組(

9、P<0.05);依葉片組4周、8周亞組大鼠心肌細(xì)胞GRP78表達(dá)明顯低于高蛋氨酸組相應(yīng)亞組(P<0.05);⑤對照組及高蛋氨酸組大鼠心肌細(xì)胞 CHOP表達(dá)隨應(yīng)激時(shí)間的增長而升高,高蛋氨酸組4周、8周亞組大鼠心肌細(xì)胞CHOP表達(dá)均明顯高于對照組相應(yīng)亞組(P<0.05);依葉片組4周、8周亞組大鼠心肌細(xì)胞CHOP表達(dá)均明顯低于高蛋氨酸組相應(yīng)亞組(P<0.05);
　　研究結(jié)論：
　　心臟壓力過負(fù)荷觸發(fā)大鼠心肌細(xì)胞ERS,而血清高

10、濃度Hcy使心肌細(xì)胞ERS加重,早期即導(dǎo)致ERS保護(hù)因子GRP78和促凋亡因子CHOP表達(dá)失衡,CHOP表達(dá)占優(yōu)勢,介導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大凋亡,最終引起左室肥厚程度加重;依那普利葉酸片有效降壓及降低血清Hcy濃度,減輕心肌細(xì)胞ERS,表現(xiàn)為應(yīng)激相關(guān)因子GRP78和CHOP表達(dá)明顯減少,從而保護(hù)心肌細(xì)胞,有效逆轉(zhuǎn)左室肥厚。故認(rèn)為 HHcy加重高血壓左室肥厚,ERS可能是其致病的分子生物學(xué)機(jī)制之一;依那普利葉酸片通過抑制ERS保護(hù)心肌細(xì)胞,有效改