UCP2在2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病中的表達(dá)和意義.pdf

1、目的:近年,2型糖尿病(type2 diabetesmellitus,T2DM)、非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)發(fā)病率逐年增高,而2型糖尿病患者中非酒精性脂肪性肝病的發(fā)病率達(dá)到50％以上,肥胖、胰島素抵抗(Insulin Resistance, IR)、糖脂代謝紊亂是2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病發(fā)生的主要原因,解偶聯(lián)蛋白2(uncoupling protein-2

2、,UCP2)是線粒體內(nèi)膜上調(diào)節(jié)質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)的陰離子載體蛋白,與胰島素抵抗、氧化應(yīng)激、能量穩(wěn)態(tài)及糖脂代謝等密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建2型糖尿病、非酒精性脂肪性肝病及2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病的大鼠疾病模型,研究多種炎性因子及解偶聯(lián)蛋白1(uncoupling protein-1,UCP1)、UCP2在上述疾病模型中表達(dá)的變化,探討UCP2在T2DM并發(fā)NAFLD的發(fā)生中的作用,為進(jìn)一步研究2型糖尿病并發(fā)非酒精性脂肪性肝病的發(fā)病機(jī)制,臨床治

3、療肥胖、糖尿病、脂肪肝尋求新靶點(diǎn)。
　　方法:
　　1.建立動(dòng)物模型:60只雄性健康SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(NC組)、2型糖尿病組(T2DM組)、非酒精性脂肪肝病組(NAFLD組)、2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病組(T2DMN組)。2型糖尿病組予高脂飲食喂養(yǎng),非酒精性脂肪肝病組與2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病組予改良高脂飲食喂養(yǎng),8周后2型糖尿病組與2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病組腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotoc

4、in,STZ),對(duì)照組與非酒精性脂肪肝組腹腔注射等量生理鹽水。
　　2.監(jiān)測大鼠體重,實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),測定空腹血糖、隨機(jī)血糖,肝臟取材,稱量肝臟的濕重,計(jì)算肝指數(shù)、胰島素敏感指數(shù)、胰島素抵抗指數(shù),行光鏡、電鏡觀察肝臟病理組織學(xué)改變。確定各組是否造模成功。
　　3.全自動(dòng)生化分析儀檢測丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferas

5、e,AST)、高敏C反應(yīng)蛋白(high sensitive C reactive protein,hs-CRP)、甘油三酯(triglyceride,TG)以及總膽固醇(total cholesterol,TC)。雙抗體放射免疫分析法測定血清空腹胰島素(fasting insulin,FINS)。酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)測定血清脂聯(lián)素(adiponectin,APN

6、)、游離脂肪酸(free fatty acid,FFA)水平的變化。應(yīng)用免疫組化檢測肝臟組織中 UCP1和 UCP2蛋白表達(dá),實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time quantitativepolymerase chain reaction,RT-PCR)檢測UCP1和UCP2的mRNA表達(dá),免疫印跡法(Western blotting,WB)法檢測肝臟組織中UCP1和UCP2蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.生長情況:(1

7、)各組大鼠的體重均呈現(xiàn)增長趨勢。(2)模型組與NC組對(duì)比體重增長明顯,4周與8周時(shí)有明顯差異(P<0.05)。(3)NAFLD組與T2DMN組間無明顯差異,NAFLD組、T2DMN組與T2DM組4周時(shí)無差異,8周時(shí)有明顯差異(P<0.05)。
　　2.大鼠的肝臟形態(tài)學(xué)變化:NAFLD組、T2DMN組大鼠肝臟的形態(tài)、大小和NC組、T2DM組比較有明顯改變。模型組大鼠光鏡及電鏡的超微結(jié)構(gòu)變化較NC組明顯。各組肝臟脂肪變性程度存在明顯差

8、異(P<0.05)。
　　3.血糖、胰島素抵抗指數(shù)、胰島素敏感指數(shù):(1)空腹血糖、隨機(jī)血糖: NC組、NAFLD組與T2DM組、T2DMN組比較有明顯差異(P<0.05),NC組與NAFLD組, T2DM組與 T2DMN組比較無明顯差異。(2)胰島素抵抗指數(shù)、胰島素敏感指數(shù):NC組、NAFLD組與T2DM組、T2DMN組比較有明顯差異(P<0.05),NC組與NAFLD組,T2DM組與T2DMN組比較有明顯差異。
　　4.

9、炎性因子檢測:模型組與 NC組對(duì)比,模型組血清 APN含量均降低,模型組之間相比較,T2DM組、NAFLD組、T2DMN組依次降低,有明顯差異(P<0.05)。模型組與NC組對(duì)比,FFA及hs-CRP含量均顯著升高,模型組之間相比較,T2DM組、NAFLD組、T2DMN組依次升高,有明顯差異(P<0.05)。
　　5.免疫組化及western blot檢測:(1)UCP1蛋白在NC組、T2DM組中呈低表達(dá),在NAFLD組及T2DM

10、N組中呈高表達(dá),且T2DMN組表達(dá)陽性程度與NAFLD組比較有明顯差異(P<0.05)(2)UCP2蛋白在NC組中呈低表達(dá),在模型組中呈高表達(dá),且表達(dá)陽性程度以T2DM組、NAFLD組、T2DMN組依次升高,各組之間比較有明顯差異(P<0.05)。
　　6.RT-PCR檢測:(1)UCP1mRNA在NC組、T2DM組中呈低表達(dá),在NAFLD組及T2DMN組中呈高表達(dá),且T2DMN組表達(dá)陽性程度與NAFLD組比較有明顯差異(P<0.

11、05)。(2)UCP2mRNA在 NC組中呈低表達(dá),在模型組中呈高表達(dá),且表達(dá)陽性程度以T2DM組、NAFLD組、T2DMN組依次升高,各組之間比較有明顯差異(P<0.05)。
　　7.肝臟脂肪變性程度與UCPs的相關(guān)性:通過相關(guān)性分析,肝臟脂肪變性程度與UCPs表達(dá)存在相關(guān)性(P<0.05)。
　　8.相關(guān)因子與UCPs的相關(guān)性:通過相關(guān)性分析,APN與UCPs表達(dá)存在負(fù)相關(guān)性(P<0.05),FFA、hs-CRP及胰島素