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文檔簡介
1、第一部分人參皂苷Rb1動員自體靜脈移植兔骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖的實驗研究
背景與目的:內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)是內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞,是一群具有游走功能并能增殖分化的幼稚細(xì)胞,不僅可以遷移至外周血中分化為成熟內(nèi)皮細(xì)胞,參與胚胎時期的血管生成、出生后的新生血管的生長,還可以在一定條件下轉(zhuǎn)化為平滑肌細(xì)胞,并且能夠歸巢在內(nèi)皮細(xì)胞受損部位,分化為內(nèi)皮細(xì)胞,參與受損內(nèi)皮細(xì)胞的修復(fù),為靜脈血管橋的再狹窄的預(yù)防提供了新的思路。內(nèi)皮祖細(xì)胞來源廣泛
2、,且具有易于分離、增殖能力強等多方面的特點,已成為血管組織工程中一種重要的種子細(xì)胞。正常情況下成熟血管內(nèi)皮細(xì)胞與內(nèi)皮的損傷以及內(nèi)皮祖細(xì)胞對血管內(nèi)皮的修復(fù)處于一種動態(tài)的平衡之中。病理狀態(tài)下,機體儲備的內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖并釋放入外周血,并向內(nèi)皮損傷部位定向遷移、粘附,協(xié)助修復(fù)損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞,有效的減輕靜脈橋血管的再狹窄。靜脈移植術(shù)后的再狹窄,末期主要是粥樣硬化,而血管內(nèi)皮損傷是其始動因素,內(nèi)皮細(xì)胞損傷后,巨噬細(xì)胞粘附、浸入及平滑肌細(xì)胞過度增
3、殖導(dǎo)致受損血管管腔狹窄或者閉塞。促進(jìn)損傷血管的內(nèi)皮修復(fù)可有效抑制平滑肌細(xì)胞增殖及新生內(nèi)膜的形成,為治療靜脈移植血管的再狹窄提供了一個新的方向。
以往的研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rb1能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基中的內(nèi)皮祖細(xì)胞的增生,但未見有關(guān)于其對骨髓中內(nèi)皮祖細(xì)胞影響的報道,實驗通過在建立動物血管移植模型的基礎(chǔ)上,觀察動物股骨骨髓中內(nèi)皮祖細(xì)胞表面標(biāo)志CD34+、CD133+和VEGFR2+的陽性表達(dá)情況,探討人參皂苷Rb1對自體靜脈移植兔
4、骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖的影響。
材料與方法:45只清潔級新西蘭兔隨機分為實驗組、模型組、對照組3組,每組15只。應(yīng)用“no-touch”技術(shù)獲取頸外靜脈后,剪斷頸總動脈,采用連續(xù)縫合方法端端吻合頸外靜脈一頸總動脈,建立頸外靜脈和頸總動脈移植的動物模型。4周后,取移植靜脈血管,利用HE染色觀察靜脈移植血管內(nèi)膜厚度以及內(nèi)膜/中膜厚度比,免疫組化觀察骨髓內(nèi)CD34+、CD133+和VEGFR2+陽性細(xì)胞情況,RT-PCR檢測骨髓內(nèi)C
5、D34+、CD133+和VEGFR2*陽性mRNA表達(dá)情況。
結(jié)果:
1、移植靜脈橋血管狹窄程度觀察
石蠟切片HE染色光鏡下觀察分析結(jié)果顯示:移植4周后的實驗組、模型組、對照組血管的內(nèi)膜厚度分別為(46.53±2.50)μm、(50.80±2.68)μm、(43.73±3.24)μm,各組間比較P<0.05,實驗組、模型組、對照組組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義。3組靜脈內(nèi)膜/中膜厚度比分別為(1.96±0
6、.06)、(2.11±0.07)、(1.81±0.09),各組間比較P<0.05,實驗組、模型組、對照組組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義。
2、骨髓免疫組化
CD34+、CD133+和VEGFR2+陽性細(xì)胞觀察各組移植靜脈血管中可見CD34+、CD133+和VEGFR2+陽性細(xì)胞表達(dá).4周后,實驗組陽性細(xì)胞表達(dá)高于模型組,模型組陽性細(xì)胞表達(dá)高于對照組,實驗組、模型組、對照組組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義。
3、骨髓R
7、T-PCRCD34+、CD133+和VEGFR2+基因表達(dá)情況觀察
各組移植靜脈血管中可見CD34+、CD133+和VEGFR2+mRNA表達(dá),CD34+在實驗組、模型組、對照組表達(dá)的相對系數(shù)分別是(2.32±0.08)、(2.08±0.12)、(1.88±0.11),各組間比較P<0.05,實驗組、模型組.對照組組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義;CD133+在實驗組、模型組、對照組表達(dá)的相對系數(shù)分別是(2.46±0.12).(2.2
8、4±0.09).(1.97±0.15),各組間比較P<0.05,實驗組、模型組,對照組組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義;VEGFR2+在實驗組、模型組.對照組表達(dá)的相對系數(shù)分別是(1.92±0.14),(1.79±0.15).(1.55±0.09),各組間比較P<0.05,實驗組、模型組、對照組組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義。
結(jié)論:
1.自體靜脈移植兔骨髓CD34+、CD133+和VEGFR2+表達(dá)增強;
2.人參
9、皂苷Rb1能夠促進(jìn)骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞的增生。
第二部分人參皂苷Rb1抑制兔自體靜脈移植物再狹窄的實驗研究
背景與目的:冠狀動脈旁路移植術(shù)(CABG)是治療冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的主要方法之一,大隱靜脈作為冠脈旁路移植術(shù)的主要材料,由于位置表淺,取材方便,并且有足夠的長度連接主動脈與遠(yuǎn)端的冠狀動脈,使其在臨床上得以廣泛應(yīng)用。但是手術(shù)操作造成的血管內(nèi)膜損傷、血流動力學(xué)改變以及炎癥因子釋放等一系列變化引起靜脈橋血管術(shù)
10、后再狹窄,使得靜脈橋血管在臨床上的應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)期效果欠佳。近年來,一系列預(yù)防靜脈移植血管再狹窄的方法,如藥物治療、基因治療、血管外支架、擴張液、內(nèi)皮祖細(xì)胞等應(yīng)用于臨床,但是均未取得明確效果。有報道稱:人參皂苷Rb1對抑制靜脈橋血管再狹窄有一定的積極作用。實驗即是在建立自體靜脈移植血管動物模型的基礎(chǔ)上,通過腹腔注射一定劑量的人參皂苷Rb1成品,觀察靜脈移植血管內(nèi)膜厚度的變化以及血管內(nèi)膜中增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β
11、)和內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)的變化,探討人參皂苷Rb1對自體靜脈移植血管再狹窄的抑制作用,為以后的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
材料與方法:45只清潔級新西蘭兔隨機分為實驗組、模型組、對照組3組,每組15只。應(yīng)用“no-touch”技術(shù)獲取頸外靜脈后,剪斷頸總動脈,采用連續(xù)縫合方法端端吻合頸外靜脈和頸總動脈,建立頸外靜脈一頸總動脈搭橋的動物模型。4周后,取靜脈移植血管,利用HE染色觀察靜脈移植血管內(nèi)膜厚度以及內(nèi)膜/中膜厚度
12、比,免疫組化觀察靜脈移植血管增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)陽性細(xì)胞指數(shù)、TGF-β、eNOS變化情況,RT-PCR檢測靜脈移植血管中TGF-β、eNOS mRNA基因的表達(dá)。
結(jié)果:
1、移植靜脈橋血管狹窄程度觀察:石蠟切片HE染色光鏡下觀察分析結(jié)果顯示:移植4周后的實驗組、模型組、對照組血管的內(nèi)膜厚度分別為(46.53±2.50)μm、(50.80±2.68)μm、(43.73±3.24)μm,各組間比較P<0
13、.05,實驗組、模型組、對照組組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義。三組靜脈內(nèi)膜/中膜厚度比分別為(1.96±0.06)、(2.11±0.07)、(1.81±0.09),各組間比較P<0.05,實驗組、模型組、對照組組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義。
2、移植靜脈橋血管免疫組化染色結(jié)果觀察:各組移植靜脈血管中可見PCNA、eNOS、TGF-β陽性細(xì)胞表達(dá)。移植4周后的實驗組、模型組、對照組PCNA陽性表達(dá)指數(shù)分別是(40.63±2.30)、(60.4
14、5±3.38)、(19.89±2.56),各組間比較P<0.05,實驗組、模型組、對照組組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義。實驗組、模型組、對照組TGF-β陽性表達(dá)指數(shù)分別是(18.15±4.31)、(29.28±6.37)、(12.63±3.72),各組間比較P<0.05,實驗組、模型組、對照組組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義。實驗組、模型組、對照組eNOS陽性表達(dá)指數(shù)分別是(25.64±5.03)、(17.91±3.75)、(10.25±2.31),各組間比
15、較P<0.05,實驗組、模型組、對照組組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義。
3、移植靜脈橋血管RT-PCR結(jié)果觀察:各組移植靜脈血管可見eNOS、TGF-β基因表達(dá)。eNOS在實驗組、模型組、對照組表達(dá)的相對系數(shù)分別為(2.12±0.05)、(1.98±0.09)、(1.72±0.09),eNOS在實驗組中表達(dá)的相對系數(shù)高于模型組和對照組,各組間比較P<0.05,實驗組、模型組、對照組組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義。TGF-β在實驗組、模型組、對
16、照組表達(dá)的相對系數(shù)分別為(1.95±0.08)、(2.10±0.01)、(1.82±0.01),TGF-β在模型組中表達(dá)的相對系數(shù)高于實驗組和對照組,各組間比較P<0.05,實驗組、模型組、對照組組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義。
結(jié)論:
1、內(nèi)膜損傷是移植靜脈血管再狹窄的始動因素,血管壁重塑是靜脈血管產(chǎn)生再狹窄的根本原因。
2、人參皂苷Rb1能夠有效的防治移植靜脈血管再狹窄。
3、人參皂苷R
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