三七皂苷動員apoE---小鼠骨髓來源內皮祖細胞防治動脈粥樣硬化及其機制的研究.pdf

1、動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)由于高發(fā)病率、高致殘率和高死亡率嚴重威脅人類的生存質量和期望壽命。作為眾多心血管疾病發(fā)生的病理基礎和關鍵環(huán)節(jié),AS防治已成為全世界共同關注的重大課題。動脈內皮細胞的損傷和功能失調被認為是AS發(fā)生的始動環(huán)節(jié)和重要的病理基礎,因此,受損動脈內皮單層的恢復和重建成為防治AS的必要條件。傳統(tǒng)的觀點認為內皮細胞可通過增殖并遷徙至受損區(qū)域,發(fā)揮修復功能,但是成熟的內皮細胞增殖能力非常有限。近年來的

2、研究表明內皮祖細胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)強大的修復血管內皮的作用可減緩動脈粥樣硬化的進程,因此,通過藥物動員內源性EPCs,從而增加循環(huán)中EPCs的數(shù)量,加速損傷內膜的重新內皮化成為防治AS的有效途徑。三七皂苷(panaxnotoginsengsaponins,PNS)是活血化瘀中藥三七的主要活性成分,本室前期的實驗結果表明PNS通過多途徑防治AS。本研究將探討PNS通過對骨髓來源EPCs的動

3、員、增強損傷血管內皮化與其防治AS的關系,并初步揭示其相關機理,以期為深化三七內皮保護及AS防治作用機制提供新的實驗依據。
　　方法:
　　8周齡apoE-/-小鼠均予以高脂飼料并隨機分為模型組、PNS低劑量組和PNS高劑量組,分別給予生理鹽水、60mg/kg和120mg/kgPNS腹腔注射。8周后,對apoE-/-
　　小鼠胸主動脈進行HE、彈力纖維和β-半乳糖苷酶染色,并在光鏡下觀察病理形態(tài)學改變;流式細胞儀檢測骨

4、髓和外周血CD117+/Ly-6+和FLK+/Ly-6+細胞并計數(shù);ELISA方法測定血清和骨髓上清中的MMP-9,SDF-1α和SCF濃度;免疫組織化學方法測定胸主動脈VWF、α-SMA、SDF-1α和CXCR4表達,骨髓SDF-1α和CXCR4表達;Real-timePCR法檢測骨髓SDF-1α、CXCR4、PI3K、c-Kit和SCFmRNA表達以及和胸主動脈SDF-1α、CXCR4mRNA表達。
　　結果
　　1.與

5、模型組相比,60mg/kg和120mg/kgPNS組斑塊面積均顯著性減少(P<0.05或P<0.01),內膜與中膜比值(P<0.01)顯著降低。
　　2.與模型組相比,PNS兩個劑量組胸主動脈VWF陽性細胞層的長度顯著增加(P<0.01);內膜α-SMA含量較模型組顯著下降(P<0.05或P<0.01)。
　　3.光鏡下,模型組胸主動脈彈力纖維層數(shù)明顯減少,排列疏散,并且有多處斷裂現(xiàn)象,而PNS組彈力纖維則排列致密,連續(xù),未

6、發(fā)生斷裂;與模型組比較,60mg/kg和120mg/kgPNS組胸主動脈β-半乳糖苷酶染色后的藍色面積明顯減少。
　　4.與模型組相比,60mg/kg和120mg/kgPNS組骨髓和外周血中CD117+/Ly-6+和FLK+/Ly-6+標記的細胞數(shù)明顯增加(P<0.05或P<0.01)。
　　5.60mg/kg和120mg/kgPNS組外周血中SDF-1α和SCF濃度較模型組顯著性升高(P<0.05或P<0.01),MMP-

7、9濃度較模型組沒有顯著變化。120mg/kgPNS組骨髓中SDF-1α濃度較模型組顯著性下降(P<0.01),60mg/kg和120mg/kgPNS組SCF和MMP-9濃度較模型組顯著升高(P<0.05或P<0.01)。
　　6.與模型組相比,120mg/kgPNS組骨髓中SDF-1α表達顯著下降(P<0.01),60mg/kg和120mg/kgPNS組CXCR4表達均顯著增加(P<0.05或P<0.01)。
　　7.與模型

8、組相比,60mg/kg和120mg/kgPNS組胸主動脈中SDF-1α、CXCR4表達均顯著增加(P<0.05或P<0.01)
　　8.60mg/kg和120mg/kgPNS組骨髓中SDF-1α、CXCR4、SCF和PI3KmRNA表達均較模型組顯著升高(P<0.05或P<0.01),c-KitmRNA表達未見顯著變化。60mg/kg和120mg/kgPNS組胸主動脈中SDF-1α、CXCR4mRNA表達均較模型組顯著升高(P<0