小鼠子宮內(nèi)膜損傷后修復(fù)的初步研究.pdf

1、在女性整個(gè)生育周期中，子宮內(nèi)膜表現(xiàn)出明顯周期性變化，其獨(dú)特的修復(fù)再生能力引起了眾多研究者的興趣。在分泌晚期未孕的子宮中因?yàn)辄S體退化，雌孕激素水平下降，引發(fā)一系列分子水平和細(xì)胞水平的反應(yīng)，最終導(dǎo)致上三分之二的子宮內(nèi)膜（子宮內(nèi)膜功能層）崩解脫落以及出血。子宮內(nèi)膜的修復(fù)再生發(fā)生于其周期性崩解之后，并受到精細(xì)的機(jī)制調(diào)控。
　　 研究子宮內(nèi)膜修復(fù)再生過(guò)程對(duì)于女性月經(jīng)失調(diào)等方面的研究和治療方案制定均有重要的意義。近期的許多綜述中均表現(xiàn)出了子

2、宮內(nèi)膜損傷相關(guān)研究的濃厚興趣，但是我們對(duì)于其中涉及的生理及病理機(jī)制卻知之甚少。另一方面，子宮內(nèi)膜在月經(jīng)崩解或者分娩等劇烈損傷后可以迅速并且無(wú)疤痕的愈合。研究子宮內(nèi)膜修復(fù)再生的機(jī)制可以為其他組織傷口愈合過(guò)程的研究提供線(xiàn)索和思路。因此，我們對(duì)于子宮內(nèi)膜修復(fù)再生的機(jī)制進(jìn)行了一些探索，其中涉及了激素調(diào)控等方面的研究。
　　 1．目的：探討假孕小鼠月經(jīng)模型中，雌激素水平對(duì)子宮內(nèi)膜崩解后修復(fù)再生進(jìn)程的影響。
　　 方法：對(duì)假孕小鼠一

3、側(cè)子宮人工誘導(dǎo)內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞發(fā)生蛻膜化，并通過(guò)雙側(cè)卵巢切除的方式實(shí)現(xiàn)孕酮撤退，建立小鼠月經(jīng)模型。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為雌激素組以及溶媒對(duì)照組，在孕酮撤退后24H及48H檢測(cè)各組子宮重量改變，血清雌激素水平，切片形態(tài)學(xué)觀(guān)察，并對(duì)進(jìn)行評(píng)級(jí)。
　　 結(jié)果：統(tǒng)計(jì)學(xué)比較孕酮撤退48H兩組血清激素水平和形態(tài)學(xué)評(píng)級(jí)結(jié)果，差異具有顯著性，雌激素組修復(fù)率明顯高于溶媒對(duì)照組。
　　 結(jié)論：在假孕小鼠月經(jīng)模型中，雌激素組小鼠較溶媒對(duì)照組小鼠修復(fù)更加

4、快速，說(shuō)明雌激素水平對(duì)于子宮內(nèi)膜崩解后修復(fù)進(jìn)程有一定影響。
　　 2．目的：探討小鼠模型中子宮內(nèi)膜生理?yè)p傷和機(jī)械損傷后修復(fù)進(jìn)程的異同。
　　 方法：建立小鼠月經(jīng)出血樣模型以及小鼠子宮內(nèi)膜機(jī)械損傷模型，并在損傷后0H、24H、48H和72H分別檢測(cè)兩組模型組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)、網(wǎng)狀纖維結(jié)構(gòu)、BrdU標(biāo)記細(xì)胞分布、CD31和VEGF表達(dá)。
　　 結(jié)果：子宮內(nèi)膜在生理?yè)p傷和機(jī)械損傷后修復(fù)過(guò)程經(jīng)歷宮腔上皮再生，間質(zhì)結(jié)構(gòu)重建，血

5、管新生等過(guò)程。結(jié)果顯示機(jī)械損傷子宮內(nèi)膜修復(fù)過(guò)程緩慢，間質(zhì)細(xì)胞發(fā)生明顯水腫，細(xì)胞間隙增大，損傷區(qū)域僅見(jiàn)少量散在白細(xì)胞浸潤(rùn)。并且損傷后兩組子宮內(nèi)膜VEGF表達(dá)高峰以及血管密度變化均有時(shí)程上的差異。連續(xù)的BrdU腹腔注射，標(biāo)記修復(fù)過(guò)程中全部發(fā)生增殖分裂的細(xì)胞，在生理?yè)p傷后子宮內(nèi)膜宮腔上皮被連續(xù)標(biāo)記，然而間質(zhì)區(qū)域僅有零星的陽(yáng)性細(xì)胞被觀(guān)察到。在機(jī)械損傷后的內(nèi)膜組織中卻可以檢測(cè)到間質(zhì)區(qū)域密集的BrdU陽(yáng)性細(xì)胞，通過(guò)BrdU與CD31熒光免疫雙染可以

6、確定，這些密集排列的BrdU陽(yáng)性細(xì)胞中包含大量分裂增殖的間質(zhì)細(xì)胞。
　　 結(jié)論：即使在激素水平相當(dāng)?shù)那闆r下，機(jī)械損傷后子宮內(nèi)膜修復(fù)較生理?yè)p傷緩慢。且兩組子宮內(nèi)膜損傷后間質(zhì)表現(xiàn)存在差異可能由于生理?yè)p傷未發(fā)生時(shí)組織對(duì)于“預(yù)期損傷”已做出準(zhǔn)備，并導(dǎo)致生理?yè)p傷后子宮內(nèi)膜修復(fù)較為快速。
　　 3．目的：建立簡(jiǎn)單高效的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)。
　　 方法：小鼠月經(jīng)藥理撤退模型中，孕酮藥理性撤退后12小時(shí)、18小時(shí)和2

7、8小時(shí)左右，向小鼠宮腔內(nèi)注射滴度為1×109TU/ml的慢病毒溶液12μl，進(jìn)行子宮內(nèi)膜特異性轉(zhuǎn)導(dǎo)。注射后一周后取出小鼠子宮，并采用冰凍切片觀(guān)察轉(zhuǎn)導(dǎo)效果。
　　 結(jié)果：轉(zhuǎn)導(dǎo)效果與轉(zhuǎn)基因操作時(shí)間具有一定聯(lián)系。在米非司酮處理后28小時(shí)左右進(jìn)行注射，轉(zhuǎn)導(dǎo)效果較好。轉(zhuǎn)導(dǎo)后7天可以觀(guān)察到子宮中段超過(guò)全長(zhǎng)1/3的部分存在成功轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞，在子宮橫切面觀(guān)察最高可有70％的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞被轉(zhuǎn)導(dǎo)。
　　 結(jié)論：利用小鼠藥理撤退月經(jīng)樣模型與