菊花DgWRKY5及DgWRKY4基因的克隆和功能鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、菊花作為我國十大傳統(tǒng)名花之一，除了有極高的觀賞、藥用、食用價值外，還有較高的經(jīng)濟價值，在世界各地廣泛栽植，深受廣大民眾的喜愛。然而在菊花的生產(chǎn)實踐過程中，常常受到如干旱、高鹽等不利環(huán)境因子的影響，因此，培育耐鹽性強的切花菊新品種成為菊花育種的重要目標之一。
　　本實驗以菊花為實驗材料，基于新一代高通量測序技術Illumina HiSeq2000對菊花轉(zhuǎn)錄組進行測序獲得數(shù)據(jù)庫，從中篩選出具有完整開放閱讀框的基因，利用電子克隆和RT-

2、PCR技術克隆得到新的WRKY類轉(zhuǎn)錄因子，分別命名為DgWRKY5和DgWRKY4，后通過農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)化菊花和煙草，分別獲得了轉(zhuǎn)DgWRKY5基因菊花和轉(zhuǎn)DgWRKY4基因煙草。序列分析顯示:DgWRKY5的開放閱讀框為1603bp，編碼540個氨基酸殘基，基因編碼蛋白質(zhì)分子量為60.0KDa，等電點為7.07;對獲得的轉(zhuǎn)DgWRKY5基因菊花進行鹽脅迫試驗，在400mMNaCl鹽脅迫條件下，野生型的菊花葉片比轉(zhuǎn)基因菊花葉片發(fā)黃和萎蔫

3、，而且葉綠素含量降低。
　　序列分析顯示:DgWRKY4的開放閱讀框為1534bp，編碼482個氨基酸殘基，基因編碼蛋白質(zhì)分子量為53.6KDa，等電點為7.35;對獲得的轉(zhuǎn)DgWRKY4基因煙草進行表型觀察發(fā)現(xiàn):在正常情況下，野生型和4個轉(zhuǎn)DgWRKY4基因株系在整個生命周期中表型無顯著差異;對轉(zhuǎn)DgWRKY4基因煙草進行鹽脅迫試驗，在150mM NaCl鹽脅迫條件下，轉(zhuǎn)基因煙草發(fā)芽率(58-60％)顯著高于野生型的煙草(25％

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