菊花與青蒿MET1基因克隆及菊花RNAi載體構(gòu)建.pdf

1、菊花（Dendranthema×morifolium）是一種多年生宿根草本植物，其品種繁多，花色、花型多姿多彩，具有很高的觀賞價(jià)值。如何改變其相關(guān)性狀獲得更多既滿足觀賞性，又滿足花卉種植需求的品種越來(lái)越引起人們的興趣。青蒿(Artemisia carvifolia)是一種一年的生草本植物，普遍被作為一種砧木，用于菊花等一系列花卉的嫁接。表觀遺傳是指DNA序列之外的改變而導(dǎo)致的可遺傳的變異，DNA甲基化是最早被研究的表觀遺傳形式。本研究通

2、過(guò)克隆菊花和青蒿MET1基因，尋找兩物種MET1基因中低同源性基因片段，構(gòu)建只能干涉菊花而不能干涉青蒿的RNAi載體，為本實(shí)驗(yàn)室后期工作提供基礎(chǔ)。以青蒿為砧木，一旦獲得菊花DNA甲基轉(zhuǎn)移酶基因的RNAi砧木，則可以成為誘導(dǎo)其它所有菊花品種DNA甲基化水平變化的平臺(tái)，為菊花后續(xù)多樣性的研究提供基礎(chǔ)。
　　通過(guò)同源克隆的方法分別從菊花和青蒿中獲得MET1基因的部分同源片段，通過(guò)5'RACE和3'RACE技術(shù)獲得菊花和青蒿MET1基因的

3、剩余序列，最后經(jīng)過(guò)拼接發(fā)現(xiàn):菊花MET1基因的ORF長(zhǎng)度為5040bp，青蒿MET1基因ORF長(zhǎng)度為4932bp，兩者均與山柳菊（Hieracium pilosella）擁有很高的同源性。
　　通過(guò)生物信息學(xué)比對(duì)發(fā)現(xiàn)，菊花和青蒿兩個(gè)物種之間MET1基因的同源性達(dá)到92.65％，同源性較低的區(qū)域只有2個(gè)，分別在菊花MET1基因第1767到第1867個(gè)以及第4021到第4123個(gè)堿基之間。
　　從菊花中擴(kuò)增與青蒿低同源的MET1