多聚左旋精氨酸對(duì)NCI-H292細(xì)胞炎癥介質(zhì)調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、目的:
　　研究 NCI-H292細(xì)胞在多聚左旋精氨酸（Poly-L-arginine)聯(lián)合脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用于下白介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-8、IL-13、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子(Eotaxin)的表達(dá)水平,以及肝素和L-單甲基-精氨酸(L-NG-monomethyl-arginine,L-NMMA)對(duì)其細(xì)胞因子表達(dá)的影響。
　　方法:
　　1.細(xì)胞

2、培養(yǎng)及哮喘微環(huán)境模型的建立
　　將NCI-H292細(xì)胞培養(yǎng)在含10％胎牛血清的常規(guī)培養(yǎng)基中,每周傳代兩次;選擇生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞以3×105/500μl密度接種于24孔培養(yǎng)板中,用LPS預(yù)先將氣道上皮細(xì)胞激活,模擬哮喘氣道上皮細(xì)胞模型。
　　2.細(xì)胞因子水平的測(cè)定
　　按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分為空白對(duì)照組(培養(yǎng)液)、LPS組(5μg/ml)、多聚左旋精氨酸組(Max=40μg/ml)、LPS+poly-L-arginine組、L

3、PS+poly-L-arginine+肝素(100u/L)組、LPS+poly-L-arginine+L-NMMA(Max=0.8mM)組,并依照分組要求加入不同濃度的多聚左旋精氨酸、LPS、肝素、L-NMMA;共培養(yǎng)20小時(shí),收集細(xì)胞上清液。按照試劑盒說(shuō)明采用ELISA法檢測(cè)各組IL-6、IL-8、IL-13、Eotaxin的表達(dá)水平,并比較各組間的差異。
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)分析軟件分

4、析,數(shù)據(jù)以x±s表示。多組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA);兩兩比較時(shí)方差齊時(shí)采用LSD檢驗(yàn),方差不齊時(shí)采用Dunnett’s T3檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.在多聚左旋精氨酸作用下,IL-6、IL-8、Eotaxin的表達(dá)水平明顯增高,且在多聚左旋精氨酸為5μg/ml時(shí),IL-6、IL8的表達(dá)水平最高;在多聚左旋精氨酸為20μg/ml時(shí),Eotaxin的表達(dá)水平最高;但

5、各濃度之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而單獨(dú) LPS組、多聚左旋精氨酸組與對(duì)照組比較,IL-6、IL-8、Eotaxin的水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2.在多聚左旋精氨酸作用下,IL-13的表達(dá)未見(jiàn)明顯改變;各組IL-13的水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3.將多聚左旋精氨酸、LPS及肝素共同作用NCI-H292細(xì)胞時(shí),IL-6、IL-8、Eotaxin的表達(dá)水平明顯低于LPS+poly-L-argini

6、ne組(P<0.05)。
　　4.將多聚左旋精氨酸、LPS及 L-NMMA共同作用 NCI-H292細(xì)胞時(shí),L-NMMA對(duì)各組IL-6、IL-8的表達(dá)無(wú)影響(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.多聚左旋精氨酸能夠促進(jìn)LPS誘導(dǎo)的NCI-H292細(xì)胞IL-6、IL-8、Eotaxin的表達(dá)水平,但對(duì)IL-13的表達(dá)水平?jīng)]有影響。
　　2.肝素能夠抑制多聚左旋精氨酸聯(lián)合LPS誘導(dǎo)的NCI-H292細(xì)胞IL-6、IL