代謝型谷氨酸受體6對(duì)HaCaT細(xì)胞吞噬功能的調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、目的:
　　探討代謝型谷氨酸受體6對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞吞噬功能的調(diào)節(jié)作用的影響。
　　方法:
　　1.人角質(zhì)形成細(xì)胞體外培養(yǎng)。
　　2.蛋白免疫印跡法檢測(cè)人角質(zhì)形成細(xì)胞系(HaCaT)中代謝型谷氨酸受體6(metabotropicglutamate receptor6，mGluR6)的表達(dá)。
　　3.慢病毒轉(zhuǎn)染。利用慢病毒轉(zhuǎn)染法下調(diào)mGluR6基因在人角質(zhì)形成細(xì)胞系中的表達(dá)，建立低表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)株(Lv-shmGlu

2、R6)及陰性對(duì)照(Lv-shCon)。
　　5.利用掃描電鏡觀察Lv-shmGluR6組和Lv-shCon組細(xì)胞表面形態(tài)，觀察細(xì)胞表面葉狀偽足數(shù)量的變化。
　　6.用免疫熒光染色法處理各組細(xì)胞，用共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞微管蛋白的分布及變化。
　　7.利用熒光微球模擬角人質(zhì)形成細(xì)胞吞噬黑素小體的模型，并用共聚焦顯微鏡觀察吞噬情況。
　　9.用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Lv-shmGluR6組和Lv-shCon組細(xì)胞吞噬熒光微球能

3、力。
　　結(jié)果:
　　1.HaCaT細(xì)胞中存在mGluR6的表達(dá)且表達(dá)量豐富。
　　2.慢病毒轉(zhuǎn)染后HaCaT細(xì)胞中mGluR6蛋白水平明顯降低，mGluR6下調(diào)穩(wěn)轉(zhuǎn)構(gòu)建成功。
　　3.mGluR6下調(diào)后HaCaT細(xì)胞表面葉狀偽足數(shù)量明顯減少。
　　4.mGluR6下調(diào)后HaCaT細(xì)胞微管蛋白在細(xì)胞內(nèi)的分布明顯變化，向細(xì)胞周邊聚集，靠近核周部位明顯減少，靠近細(xì)胞膜部位密集增多。
　　5.mGluR6下

4、調(diào)后HaCaT細(xì)胞吞噬熒光微球的量明顯減少。
　　6.用熒光微球模擬HaCaT細(xì)胞吞噬黑素小體的模型，流式細(xì)胞儀檢測(cè)出mGluR6下調(diào)后其吞噬熒光微的量減少。
　　結(jié)論:
　　1.HaCaT細(xì)胞中有mGluR6的表達(dá)。
　　2.下調(diào)mGluR6后HaCaT細(xì)胞表面?zhèn)巫銛?shù)量減少。與此同時(shí)細(xì)胞的骨架蛋白分布也發(fā)生明顯變化，在核周的分布減少，多向細(xì)胞邊緣集。
　　3.利用熒光微球成功模擬出HCaT細(xì)胞吞噬黑素小體