代謝型谷氨酸受體6對HaCaT細胞吞噬功能的調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、目的:
　　探討代謝型谷氨酸受體6對人角質(zhì)形成細胞吞噬功能的調(diào)節(jié)作用的影響。
　　方法:
　　1.人角質(zhì)形成細胞體外培養(yǎng)。
　　2.蛋白免疫印跡法檢測人角質(zhì)形成細胞系(HaCaT)中代謝型谷氨酸受體6(metabotropicglutamate receptor6，mGluR6)的表達。
　　3.慢病毒轉(zhuǎn)染。利用慢病毒轉(zhuǎn)染法下調(diào)mGluR6基因在人角質(zhì)形成細胞系中的表達，建立低表達穩(wěn)轉(zhuǎn)株(Lv-shmGlu

2、R6)及陰性對照(Lv-shCon)。
　　5.利用掃描電鏡觀察Lv-shmGluR6組和Lv-shCon組細胞表面形態(tài)，觀察細胞表面葉狀偽足數(shù)量的變化。
　　6.用免疫熒光染色法處理各組細胞，用共聚焦顯微鏡觀察細胞微管蛋白的分布及變化。
　　7.利用熒光微球模擬角人質(zhì)形成細胞吞噬黑素小體的模型，并用共聚焦顯微鏡觀察吞噬情況。
　　9.用流式細胞儀檢測Lv-shmGluR6組和Lv-shCon組細胞吞噬熒光微球能

3、力。
　　結(jié)果:
　　1.HaCaT細胞中存在mGluR6的表達且表達量豐富。
　　2.慢病毒轉(zhuǎn)染后HaCaT細胞中mGluR6蛋白水平明顯降低，mGluR6下調(diào)穩(wěn)轉(zhuǎn)構(gòu)建成功。
　　3.mGluR6下調(diào)后HaCaT細胞表面葉狀偽足數(shù)量明顯減少。
　　4.mGluR6下調(diào)后HaCaT細胞微管蛋白在細胞內(nèi)的分布明顯變化，向細胞周邊聚集，靠近核周部位明顯減少，靠近細胞膜部位密集增多。
　　5.mGluR6下

4、調(diào)后HaCaT細胞吞噬熒光微球的量明顯減少。
　　6.用熒光微球模擬HaCaT細胞吞噬黑素小體的模型，流式細胞儀檢測出mGluR6下調(diào)后其吞噬熒光微的量減少。
　　結(jié)論:
　　1.HaCaT細胞中有mGluR6的表達。
　　2.下調(diào)mGluR6后HaCaT細胞表面?zhèn)巫銛?shù)量減少。與此同時細胞的骨架蛋白分布也發(fā)生明顯變化，在核周的分布減少，多向細胞邊緣集。
　　3.利用熒光微球成功模擬出HCaT細胞吞噬黑素小體