黃酮類化合物的超聲波提取、調(diào)血脂作用及機(jī)制作用的研究.pdf

1、目的： 本研究擬從探討黃酮類化合物調(diào)血脂作用角度出發(fā)，分別探討了桑椹中黃酮類的超聲輔助提取，幾種黃酮類化合物急性調(diào)血脂作用的篩選，并通過建立實(shí)驗(yàn)性高膽固醇血癥家兔模型，研究新黃酮類化合物DA-1的調(diào)血脂作用及機(jī)制，并對其不良反應(yīng)和毒性進(jìn)行初步檢測，通過臨床前藥理研究為DA-1可能進(jìn)行的臨床試驗(yàn)提供參考。 方法： (1)采用超聲波提取法從桑椹果粉中提取總黃酮，以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定黃酮含量，并以正交試驗(yàn)法確定桑椹總黃

2、酮的最佳提取工藝。 (2)將80小鼠隨機(jī)分為正常組，高脂模型組，水飛薊素組，桑椹黃酮提取液低劑量組(100mg·kg-1·d-1)，桑椹黃酮提取液高劑量組(200mg·kg-1·d-1)，DA-1組(20mg·kg-1·d-1)，HT-2組(20 mg'kg-1·d-1)，DHO2組(20 mg·kg-1·d-1)，每組10只，給藥7d后，建立急性高血脂小鼠模型，取血酶法測血清總膽固醇(TC)、總甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽

3、固醇(HDL-c)及低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c) (3)將48只同本大耳兔分為正常組，高膽固醇血癥模型組，阿托伐他汀組(2.5 mg·kg-1·d-1)，DA-1低劑量組(5 mg·kg-1·d-1)，DA-1中劑量組(10 mg·kg-1·d-1)，DA-1高劑量組(20 mg·kg-1·d-1)，每組8只，采用灌喂高脂乳劑的方法建立實(shí)驗(yàn)性高膽固醇血癥家兔模型。給藥2w和4w后，酶法測定血清FC、TG、LDL-c、HDL-

4、c，并根據(jù)公式計(jì)算AI、CHO-R。末次給藥后，取肝、腹主動脈及腹部脂肪，稱肝重及脂肪重，計(jì)算肝指數(shù)及脂肪指數(shù)。病理切片觀察肝臟及動脈形態(tài)學(xué)變化。免疫組化法檢測肝臟LDLR的表達(dá)水平，黃嘌呤氧化酶法測定血清SOD活性、TBA法測定血清MDA含量，硝酸還原酶法測定血清NO濃度。 (4)50mg/kg、150mg/kg灌喂DA-1四周后，測定大鼠肝腎功能指標(biāo)，考察DA-1對肝腎功能的影響。一次性給小鼠灌胃DA-1(6g/kg)、大鼠

5、灌胃DA-1(4g/kg)，連續(xù)14天觀察動物的狀態(tài)及死亡狀況。 結(jié)果： (1)超聲波法提取桑椹總黃酮的最佳工藝條件為A2B1C2D3，即在料液比為1：10，提取時間為40min，混合比為1：3，提取溫度為70℃的提取條件下，相對提取率為90.2％。 (2)急性調(diào)血脂實(shí)驗(yàn)表明，桑椹黃酮提取液(200mg·kg-1·d-1)、DA-1、HT-2、DHO2均可以顯著降低小鼠血清TC及LDL-c(p<0.05，p<0.

6、01)，但是桑椹黃酮提取液在100 mg·kg-1·d-1劑量條件下調(diào)血脂效果不顯著(p>0.05)。 (3)高膽固醇血癥家兔模型實(shí)驗(yàn)表明，DA-1在10 mg·kg-1·d-1、20mg·kg-1·d-1的劑量條件下，能夠顯著降低高膽固醇血癥家兔血清TC及LDL-c水平(p<0.05，p<0.01)，但在5 mg·kg-1·d-1劑量條件下，在4w時，不能有效降低TC及LDL-c，各組之間具有明顯的量效關(guān)系。DA-1三個劑量組

7、均能顯著降低高膽固醇血癥模型家兔的AI及CHD-R(p<0.05，p<0.01)，并呈明顯的量效關(guān)系。同高膽固醇血癥模型組相比，DA-1能顯著升高血清NO濃度(p<0.01)，且三個劑量組呈量效關(guān)系。同高膽固醇血癥模型組相比，DA-1能夠有效提高血清SOD活性，并降低血清MDA含量(p<0,05，p<0.01)，且三個劑量組呈量效關(guān)系。LDLR表達(dá)結(jié)果顯示，高膽固醇血癥模型組與DA-1低劑量組LDLR表達(dá)呈弱陽性(+)，DA-1中劑量組

8、呈中度陽性(++)，而DA-1高劑量組和阿托伐他汀組表達(dá)明顯高于其余各組，呈強(qiáng)陽性(+++)。連續(xù)灌胃50mg/kg、150mg/kgDA-1四周，大鼠肝功能和腎功能未見異常。急性毒性實(shí)驗(yàn)表明：小鼠和大鼠14d內(nèi)無死亡，其體重、血液生化指標(biāo)均正常，主要器官病理學(xué)檢測未見異常。DA-1對兩種性別小鼠、大鼠的急性毒性經(jīng)口服最大耐受劑量分別大于6g/kg、4g/kg。 結(jié)論： [1]桑椹中含有豐富的黃酮類物質(zhì)，超聲波法提取桑椹

9、總黃酮的最佳工藝條件是料液比為1：10，提取時間為40min，混合比為1：3，提取溫度為70℃的提取條件下，相對提取率為90.2％。 [2]桑椹黃酮提取液、DA．1、HT-2及DHO2均能有效降低急性高脂血癥小鼠血清TC及LDL-c水平，初步證明其調(diào)血脂作用。 [3]DA-1能夠顯著降低高膽固醇血癥家兔血清rc、LDL-c水平，并明顯的量效關(guān)系，表明DA-1具有良好的調(diào)血脂作用。 [4] DA-1能夠升高血清NO

10、，降低AI及CHD-R，提示可能預(yù)防因高脂血癥誘發(fā)的心血管疾病。[5]DA-1可明顯降低血清中MDA含量，增加SOD活性，有較好的抗脂質(zhì)過氧化作用，暗示DA-1可能是通過增加SOD活性，減少M(fèi)DA的生成，提高對體內(nèi)氧化自由基的清除作用，減少脂質(zhì)過氧化物反應(yīng)，從而從一定程度上會起到預(yù)防動脈粥樣硬化形成的作用。 [6] DA-1能夠有效上調(diào)肝臟LDLR表達(dá)，暗示其降低血中LDL-c的機(jī)制可能是，通過某種機(jī)制上調(diào)高膽固醇血癥家兔肝臟L