JNK選擇性抑制劑對雌激素誘導(dǎo)的ICP孕鼠肝細胞Bsep、Ntcp表達的影響.pdf

1、目的:
　　 利用乙炔雌二醇(EE)誘導(dǎo)大鼠妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥模型（Intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP），觀察孕鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、總膽汁酸濃度的變化情況，檢測孕鼠肝組織內(nèi)c-Jun、Bsep（肝細胞膽鹽輸出泵）和Ntcp（膽酸共轉(zhuǎn)運蛋白）的表達，并初步探討JNK選擇性抑制劑SP600125在雌激素誘導(dǎo)ICP孕鼠中的可能作用機制。
　　 方法:
　　 選

2、擇SPF級Sprague-Dawley(SD)孕鼠40只，按隨機數(shù)字表法隨機分為5組，每組8只。在妊娠的第15至19天分別予以一下處理:A組為正常對照組:每天一次頸部皮下注射1，2，丙二醇(propyleneglycol，PG)2.5mL· kg-1· d-1;B組為ICP模型組:每天一次頸部皮下注射濃度為0.1％的含17—β—乙炔雌二醇(EE)的丙二醇溶液2.5mg·kg-1·d-1;C組DMSO溶劑對照組:在予以乙炔雌二醇前的2小時

3、，予以腹腔注射單純的JNK抑制劑SP600125的溶劑DMSO;D、E兩組為sp600125干預(yù)組:在予以乙炔雌二醇前的2小時，予以腹腔注射JNK抑制劑SP600125腹腔內(nèi)注射(劑量分別5mg·kg-1·d-1、10 mg· kg-1·d-1)。造模及干預(yù)5天后用水合氯醛麻醉大鼠，立刻門靜脈取血檢測血清總膽汁酸(total bile acid，TBA)、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanineaminotransferase，ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨

4、酶(aspartateaminotransferase，AST)。光鏡觀察孕鼠肝臟組織病理學(xué)變化，用免疫組化法檢測各組孕鼠肝臟組織c-Jun的表達水平，并用Western blot檢測ICP相關(guān)蛋白Bsep、Ntcp的表達水平。
　　 結(jié)果:
　　 (1)血清生化指標(biāo):①B組ICP模型的TBA、ALT、AST血清指標(biāo)增高，與正常對照組A組相比較均有顯著差異（P＜0.05），但ICP模型B組與DMSO溶劑對照C組之間，上述

5、三項生化指標(biāo)均無明顯差異（P＞0.05）;②低濃度干預(yù)D組的TBA值明顯降低，與C組比較有顯著差異(P＜0.05），而AST、ALT這兩項指標(biāo)無明顯差異(P＞0.05);③高濃度干預(yù)E組的TBA、ALT、AST血清指標(biāo)增高，與DMSO溶劑對照C組相比較均有顯著差異(P＜0.05)。
　　 (2)肝組織HE染色光鏡下結(jié)果::正常對照組，肝細胞結(jié)構(gòu)清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，無變性和壞死，肝竇擴張良好，無明顯形態(tài)學(xué)改變。ICP模型組，部分

6、肝細胞排列紊亂，肝細胞水腫變性，少量壞死，肝竇間隙狹窄明顯，部分毛細膽管可見擴張和膽栓形成;
　　 (3)肝組織c-Jun的平均灰度值:免疫組化法檢測組織的灰度值反映檢測蛋白質(zhì)的表達量，平均灰度值越高則該蛋白表達越少，反之，平均灰度值越低則該蛋白表達越多。免疫組化法檢測B組ICP模型的c-Jun的灰度值明顯降低，與正常妊娠A組相比較均有顯著差異(P＜0.05)，而B組與DMSO溶劑對照C組的c-Jun灰度值相比較，無顯著性差異(

7、P＞0.05）;但低濃度干預(yù)D組的c-Jun灰度值明顯升高，與DMSO溶劑對照C組比較，有顯著性差異(P＜0.05）;高濃度干預(yù)E組的c-Jun平均灰度值明顯高于C組和D組，均有顯著性差異(P＜0.05).
　　 (4) Western Blot檢測肝組織Bsep、Ntcp蛋白的表達:WesternBlot檢測組織的灰度值反映檢測蛋白質(zhì)的表達量，平均灰度值越高則該蛋白表達越多，反之，平均灰度值越低則該蛋白表達越少。因此，Bsep

8、、Ntcp的平均灰度值越高，Bsep、Ntcp的表達含量越高，反之，平均灰度值越低，則Bsep、Ntcp的表達含量越低。B組的平均灰度值均明顯低于A組，兩組相比較有顯著差異(P＜0.05)，而B組和C組相比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）;D組的Bsep、 Ntcp平均灰度值明顯高于C組(P＜0.05)，E組的Bsep、Ntcp平均灰度值均明顯高于C組和D組(P＜0.05).
　　 結(jié)論:
　　 (1) JNK可能參與