C-jun-AP-1抑制劑在雌激素調(diào)節(jié)BSEP及NTCP表達(dá)中的作用.pdf

1、目的:研究不同濃度17β雌二醇(E2)對(duì)L-02人正常肝細(xì)胞膽鹽輸出泵(BSEP)及鈉離子?；撬峁厕D(zhuǎn)運(yùn)子(NTCP)表達(dá)的影響以及激活蛋白-1(c-jun/AP-1)抑制劑SP600125在雌激素調(diào)節(jié)肝細(xì)胞BSEP及NTCP表達(dá)中的作用。
　　 方法:體外培養(yǎng)的人正常肝細(xì)胞株L-02,用濃度為500nM的17β-雌二醇干預(yù)不同時(shí)間(6、12、18、24、30、36小時(shí))；用不同濃度的17β-雌二醇(0.1,1.0,10,100,

2、500,1000nmol/L)干預(yù)L-02肝細(xì)胞(其中0.1、1.0、10nmol/L為生理濃度)24h；以及不同濃度的SP600125(5、10、20umon/l)與17β-雌二醇(500nmol/l)共同干預(yù)于L-02肝細(xì)胞,提取細(xì)胞總RNA并收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液,采用RT-PCR法檢測(cè)各組肝細(xì)胞BSEP與NTCP mRNA的表達(dá)情況,用生化方法檢測(cè)各組培養(yǎng)液中膽汁酸濃度。
　　 結(jié)果:(1)隨著E2作用時(shí)間延長(zhǎng),肝細(xì)胞BSE

3、P mRNA及NTCP mRNA表達(dá)水平明顯下降,各組問(wèn)比較有顯著差異性(P<0.05),且呈時(shí)間依賴(lài)性(R=-0.982,R=-0.959,P<0.05)；而培養(yǎng)液中膽汁酸濃度在6h、12h、18h、24h兩兩比較無(wú)差異性(P>0.05),30小時(shí)與24小時(shí)相比有差異性(P<0.05),36小時(shí)與30小時(shí)相比亦無(wú)明顯差別(P>0.05)；(2)生理濃度的17β-雌二醇(0.1、1.0、10nmol/L)不影響肝細(xì)胞BSEP mRNA及

4、NTCP mRNA的表達(dá)及膽汁酸的分泌,與空白對(duì)照組相比無(wú)顯著差異性(P>0.05)；而高濃度的E2下調(diào)BSEP及NTCP表達(dá)(P<0.05),并使肝細(xì)胞分泌膽汁酸減少(P<0.05),呈劑量依賴(lài)關(guān)系(R=-0.884,R=-0.868,P<0.05),且在500nmol/l時(shí)抑制作用最明顯。(3)c-jun/AP-1抑制劑SP600125可抑制AP-1的活性,明顯抑制雌激素下調(diào)BSEP及NTCP表達(dá),而使BSEP及NTCP mRNA表

5、達(dá)升高,培養(yǎng)液中膽汁酸水平升高,與對(duì)照組相比有顯著性差異(P<0.05,P<0.05,P<0.05),且呈劑量依賴(lài)關(guān)系(R=0.643,R=0.539,R=0.693,P<0.05)。
　　 結(jié)論:生理濃度雌激素不影響肝細(xì)胞BSEP及NTCP的表達(dá),而高于生理濃度的雌激素可在轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)肝細(xì)胞BSEP及NTCP的表達(dá),其抑制效應(yīng)有量效相關(guān)性；AP-1抑制劑SP600125明顯抑制雌激素下調(diào)BSEP及NTCP表達(dá),使BSEP及NT