Hcy，ox-LDL對(duì)ER及LDLR基因表達(dá)及其甲基化調(diào)控的影響.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)是危害人體健康的常見病和多發(fā)病，是發(fā)達(dá)國家最普遍的死因，也是眾多發(fā)展中國家所面臨的增長最快的死因之一。由于AS的發(fā)病機(jī)理不明確，幾十年來對(duì)AS的防治尚乏有效的措施，因此深入探討動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制，對(duì)AS的防治、降低死亡率顯得尤為迫切和重要。 DNA甲基化是后天性的基因修飾過程，是基因?qū)ν饨绛h(huán)境因素發(fā)生應(yīng)答的機(jī)制之一。越來越多的證據(jù)顯示，DNA 甲基化紊亂出現(xiàn)在多種疾病中，包括

2、腫瘤、某些X一聯(lián)鎖的遺傳疾病、自身免疫性疾病及衰老等。目前，在動(dòng)脈粥樣硬化中也發(fā)現(xiàn)存在著甲基化異常的現(xiàn)象，而雌激素受體(estrogen recep’tor，ER)α基因是目前已知的唯一的一個(gè)因其啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度的異常增高，而與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中相關(guān)的基因。 高同型半胱氨酸血癥和氧化低密度脂蛋白(0xidized low density lipoprotein，ox-LDL)是公認(rèn)的致動(dòng)脈粥樣硬化的兩大危險(xiǎn)因素，而這兩大

3、危險(xiǎn)因素與基因的甲基化調(diào)控有無關(guān)聯(lián)呢?低密度脂蛋白受體(low density 1ipoprotein receptor，LDLR)作為與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生密切相關(guān)的受體，其功能的下降又是否與甲基化的紊亂相關(guān)呢?帶著這些疑問，我們選擇了平滑肌細(xì)胞和THP-1單核細(xì)胞作為研究對(duì)象，使用巢式甲基化敏感性PCR法檢測ERα和LDLR基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化情況；使用免疫組織化學(xué)染色法檢測ER的蛋白表達(dá)水平；使用酶聯(lián)免疫吸附法檢測 LDLR的功能；使

4、用半定量RT-PCR法檢測ER和LDLR的mRNA水平；MTT法檢測同型半胱氨酸(homocysteine，Hey)對(duì)平滑肌細(xì)胞的活力的影響；觀察在不同濃度的Hey和ox-LDL作用不同時(shí)間下，平滑肌細(xì)胞和THP-1細(xì)胞的ER α和LDLR基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)、ERα和LDLR的蛋白表達(dá)水平及其mRNA水平有無變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)ERα基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化程度隨著Hcy作用濃度及作用時(shí)間的增加而增加，并且隨著其甲基化程度的增加，免疫組

5、化結(jié)果顯示ERα的蛋白表達(dá)水平也隨之下降，RT-PCR結(jié)果顯示ERα的mRNA表達(dá)水平亦隨之下降；MTT結(jié)果顯示平滑肌細(xì)胞在Hcy作用下隨著ERα活性的下降而出現(xiàn)增殖的現(xiàn)象；LDLR基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化在Hey作用下未發(fā)現(xiàn)明顯變化；ERα基因在低濃度的ox-LDL作用下，從原來的去甲基化狀態(tài)轉(zhuǎn)化為部分甲基化狀態(tài)，但在高濃度的ox-LDL作用下，又恢復(fù)去甲基化狀態(tài)：ox-LDL對(duì)LDLR基因的甲基化并無明顯的影響。 因此認(rèn)為Hcy