氯沙坦對ox-LDL誘導(dǎo)的人單核巨噬細(xì)胞組織因子表達(dá)的影響及其機(jī)制.pdf

1、研究背景：
　　 冠狀動脈粥樣硬化(AS)斑塊由于各種內(nèi)外因素導(dǎo)致由穩(wěn)定狀態(tài)變?yōu)椴环€(wěn)定狀態(tài)，之后發(fā)生斑塊破裂，激活內(nèi)外凝血途徑，進(jìn)而冠脈血栓出現(xiàn)，是急性冠脈事件主要的發(fā)病機(jī)理[1]。目前冠狀動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)血栓形成的機(jī)理已逐漸豐富，已經(jīng)從過去的普遍認(rèn)為的脂質(zhì)堆積假說逐漸演變成包括內(nèi)皮功能受損、組織因子、炎癥發(fā)應(yīng)、細(xì)胞凋亡等多種因素共同作用的病因?qū)W說[2]。組織因子(TF)是凝血瀑布反應(yīng)中的重要啟動因子，正常人生理狀態(tài)時，與血液

2、接觸的細(xì)胞并不表達(dá)分泌TF，但TF抗原、TF活性和TFmRNA已被證明存在于粥樣斑塊中的多種細(xì)胞中，包括內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞，尤其是富含脂質(zhì)的泡沫細(xì)胞。研究表明在斑塊的肩部及無細(xì)胞、富含脂質(zhì)的核心區(qū)域中存在大量的TF，而且多數(shù)人粥樣硬化斑塊的凋亡細(xì)胞和微粒中高密度區(qū)域也表達(dá)TF[3-4]。所有這些證據(jù)證明了TF存在于動脈硬化斑塊中，說明TF可能對斑塊血栓形成能力有關(guān)鍵的作用[5-6]，TF的表達(dá)的上升增加動脈血栓的形成的可能及提高動

3、脈斑塊由穩(wěn)定轉(zhuǎn)變成不穩(wěn)定狀態(tài)的危險。大多數(shù)急性冠脈綜合征的患者是由于斑塊轉(zhuǎn)變?yōu)椴环€(wěn)定狀態(tài)，TF暴露于血液循環(huán)中，激活凝血途徑，形成血栓從而導(dǎo)致冠脈的狹窄或堵塞。沙坦類藥（血管緊張素Ⅱ受體阻滯劑，ARB）是與AngⅡ競爭性爭奪血管緊張素Ⅱ受體(ATI)，通過阻斷AngⅡ和ATI的結(jié)合，起到降壓、保護(hù)靶器官等作用。目前ARB類藥物在高血壓、冠心病、心力衰竭、糖尿病腎病等治療中發(fā)揮了相當(dāng)重要的作用。氯沙坦是血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑，相關(guān)試驗(yàn)證明

4、，氯沙坦可糾正原發(fā)性高血壓患者內(nèi)皮功能的失調(diào)及動脈結(jié)構(gòu)的改變。但氯沙坦能否通過LOX-1介導(dǎo)的ox-LDL途徑，降低TF的表達(dá)，進(jìn)而減少急性冠脈事件的發(fā)生，該方面的研究報道較少。本實(shí)驗(yàn)以健康人外周靜脈血單核巨噬細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對象，研究氯沙坦對ox-LDL誘導(dǎo)后單核－巨噬細(xì)胞TF表達(dá)的影響并研究其可能的機(jī)制。
　　 目的：
　　 研究氯沙坦對ox-LDL誘導(dǎo)人單核－巨噬細(xì)胞組織因子(TF)表達(dá)的影響及可能的作用機(jī)制。
　

5、　 研究方法：
　　 采用體外密度離心法分離健康人單核細(xì)胞培養(yǎng)并傳至4代后，以佛波脂(160nmol/ml)誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞，培養(yǎng)24h后用于實(shí)驗(yàn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求分為空白對照組、ox-LDL組、LOX-1受體阻斷劑多聚肌苷酸組(Poly I)、氯沙坦組。RT-PCR測各組LOX-1mRNA，TFmRNA的表達(dá)狀況，ELISA檢測各組TF蛋白的表達(dá)狀況。
　　 研究結(jié)果：
　　 用10x40倍倒置顯微鏡觀察，分離的人

6、單核細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)和佛波酯誘導(dǎo)后，細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)樗笮危拙奂N壁，用流式細(xì)胞儀技術(shù)做細(xì)胞鑒定，結(jié)果顯示大部分單核細(xì)胞已經(jīng)轉(zhuǎn)變?yōu)榫奘杉?xì)胞，符合本實(shí)驗(yàn)要求。
　　 氯沙坦對ox-LDL誘導(dǎo)后人單核巨噬細(xì)胞LOX-1mRNA和TFmRNA表達(dá)作用
　　 ①對TFmRNA的作用：四實(shí)驗(yàn)組之間比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；ox-LDL組與空白對照組相比較，TFmRNA的表達(dá)顯著上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；Poly

7、I組與ox-LDL組相比較，TFmRNA的表達(dá)下調(diào)(P＜0.01)，且多于空白對照組(P＜0.01)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；氯沙坦組與ox-LDL組比較，TFmRNA的表達(dá)下調(diào)(P＜0.01)，且多于空白對照組(P＜0.01)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 ②對LOX-ImRNA的作用：四實(shí)驗(yàn)組之間比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；Ox-LDL組與空白對照組相比較，LOX-ImRNA的表達(dá)明顯上升，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0

8、.01)：Poly I組與ox-LDL組比較，LOX-ImRNA的表達(dá)下調(diào)(P=0.027)，且多于空白對照組(P＜0.01)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；氯沙坦組與ox-LDL組相比較，LOX-ImRNA的表達(dá)下調(diào)(P=0.010)，且多于空白對照組(P＜0.01)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 氯沙坦對ox-LDL誘導(dǎo)的人單核一巨噬細(xì)胞TF蛋白表達(dá)的作用
　　 四實(shí)驗(yàn)組之間比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)：Ox-LDL

9、組與空白對照組相比較，TF的表達(dá)明顯上升，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；Poly I與ox-LDL組比較，TF的表達(dá)下調(diào)(P=0.027)，且多于空白對照組(P＜0.01)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；氯沙坦組與ox-LDL組比較，TF的表達(dá)下調(diào)(P=0.008)，且多于空白對照組(P＜0.01)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。LOX-1mRNA和TFmRNA及TF表達(dá)之間的相關(guān)性分析
　　 采用Pearson檢驗(yàn)可得出LOX-1mRNA與

10、TFmRNA之間的相關(guān)系數(shù)r=0.863 P＜0.01；LOX-1mRNA與TF之間的相關(guān)系數(shù)r=0.943 p＜0.01;TFmRNA與TF之間的相關(guān)系數(shù)r=0.883 p＜0.01。LOX-1mRNA、TFmRNA、TF之間具有J下相關(guān)性。
　　 研究結(jié)論：
　　 (1)ox-LDL可誘導(dǎo)人單核－巨噬細(xì)胞大量表達(dá)LOX-ImRNA、TFmRNA及TF蛋白。
　　 (2)LOX-1可能通過介導(dǎo)ox-LDL途徑誘