Ox-LDL對THP-1巨噬細(xì)胞自噬的影響及其作用機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：氧化低密度脂蛋白(oxdized low density lipoprotein, Ox-LDL)是低密度脂蛋白（low density lipoprotein,LDL）被活性氧（ROS）或者二價(jià)金屬離子（Cu2+，F(xiàn)e2+）氧化的產(chǎn)物。巨噬細(xì)胞通過清道夫受體吞噬 Ox-LDL，轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞，介導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis, As）的形成和發(fā)展。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中存在巨噬細(xì)胞自噬，

2、但 Ox-LDL是否調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞自噬及其調(diào)節(jié)機(jī)制尚不清楚。
　　方法：1. PMA誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞24h，使分化為巨噬細(xì)胞，再分別用0，10，20，40，80mg/L的Ox-LDL處理24h，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和免疫印跡技術(shù)（Western blot）分別檢測LC3、Beclin1、TET2的mRNA及蛋白表達(dá)情況；細(xì)胞免疫熒光檢測LC3在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況；MDC染色檢測自噬囊泡的形成。
　　2.TET2

3、siRNA轉(zhuǎn)染或DNA甲基化抑制劑(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-aza-CdR)處理THP-1源性巨細(xì)胞24h，再用80mg/L的Ox-LDL處理細(xì)胞24h，RT-PCR和Western Blot分別檢測LC3、Beclin1、TET2的mRNA及蛋白的表達(dá)情況細(xì)胞免疫熒光檢測細(xì)胞內(nèi)LC3的表達(dá)；MDC染色檢測自噬囊泡形成。
　　結(jié)果：
　　1.隨著Ox-LDL濃度的增加，THP-1巨噬細(xì)胞 Becli

4、n1mRNA及蛋白表達(dá)顯著降低（P<0.05）；LC3 mRNA表達(dá)無明顯改變（P>0.05）,但其蛋白表達(dá)顯著減少（P<0.001）；細(xì)胞免疫熒光結(jié)果表明隨Ox-LDL濃度的增加，LC3含量降低，MDC染色結(jié)果顯示隨著Ox-LDL的濃度增加，自噬囊泡減少。
　　2.TET2 siRNA轉(zhuǎn)染或DNA甲基化抑制劑處理THP-1巨噬細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與80mg/L組相比，TET2 siRNA組Beclin1mRNA及蛋白表達(dá)明顯下調(diào)