大豆提取物PC對食源性肥胖大鼠的作用及肥胖兒童的血漿蛋白組學研究.pdf

1、本文從以下幾部分進行了論述。
　　第一部分
　　目的:觀察大豆提取物PC對食源性肥胖大鼠體重和胰島素抵抗的影響并探討其機制。
　　方法:用高脂高蛋白飲食致大鼠肥胖(肥胖大鼠模型),體重大于對照組平均體重加1.96倍標準差定為食源性肥胖大鼠(DIO)。研究大鼠分為五組:(1)肥胖對照組(DIO);(2)肥胖組+灌服150mg/kg PC(DIO+PC150);(3)肥胖組+灌服75mg/kg PC(DIO+PC75);(

2、4)肥胖組+灌服37.5mg/kg PC(DIO+PC37.5);(5)10只普通飼料組大鼠作為正常對照組(Control,CN)。每日一次,連續(xù)灌服PC8周。處死大鼠,檢測/記錄體重、攝食量、腎周脂肪、睪周脂肪以及肝、腎臟器官指數(shù)變化;按照試劑盒的要求檢測血糖、血清胰島素、血脂、肝功能等指標,用ELISA法檢測血清脂聯(lián)素、血清瘦素、血清抵抗素水平,并觀察各指標變化;肝組織用不同方法切片、染色后,分別用光鏡和電鏡觀察其病理改變。

3、　　結果:(1)灌服PC后,肥胖大鼠的攝食量、體重、腎周脂肪、睪周脂肪以及肝臟器官指數(shù)均較模型組明顯減少(P<0.05,P<0.01)。(2)灌服PC后,血清胰島素、HOMA-HR、血清抵抗素、瘦素、膽固醇、甘油三酯、AST、ALT水平均顯著降低而高密度脂蛋白水平升高,與模型組比較(P<0.05,P<0.01)。LDL和脂聯(lián)素水平無明顯變化(P<0.05)。(3)光學顯微鏡顯示:食源性肥胖大鼠肝組織有大量脂肪變性,胞質內(nèi)充滿大小不一的脂

4、滴空泡,血管周圍炎癥細胞浸潤嚴重。電鏡檢查顯示:食源性肥胖大鼠肝臟肝脂滴明顯增多,線粒體腫脹,部分有纖維化。而灌服PC大鼠可明顯減輕肥胖大鼠肝臟組織結構的病理改變輕微。
　　結論:灌服PC具有明顯的減輕體重和改善胰島素抵抗的作用,該作用與抑制攝食量,降低腎周脂肪、睪周脂肪重量及體脂比、減輕血清胰島素、HOMA-HR、血清抵抗素、瘦素水平有關。PC對肥胖的脂肪肝也有一定的防治作用,使AST、ALT水平降低。其機制可能與其降低瘦素水平

5、和減輕肝臟的脂肪變性有關。
　　第二部分
　　目的:觀察PC對前脂肪細胞增殖、生長周期、分化及細胞膜上GLUT4蛋白表達的影響,探討PC對減輕體重及改善胰島素抵抗可能的作用機制。
　　方法:采用MTT和流式細胞儀法觀察PC對3T3-L1細胞增殖和生長周期的影響;用誘導劑誘導3T3-L1細胞分化,并觀察PC對細胞分化的作用;采用流式細胞儀和免疫組化兩種方法觀察PC對脂肪細胞膜上GLUT4蛋白表達的影響。
　　結果:

6、(1)PC能顯著抑制3T3-L1細胞的增殖和分化;
　　(2)PC影響脂肪細胞生長的周期,使其停止于S期;
　　(3)PC使脂肪細胞膜上GLUT4蛋白表達水平顯著升高(P<0.05,P<0.01)。
　　結論:PC減輕體重的作用可能與其抑制3T3-L1脂肪細胞的增殖和分化,干擾其正常的生長周期有關;其改善胰島素抵抗作用可能與增加脂肪細胞細胞膜上的GLUT4蛋白表達,促進葡萄糖的轉運有關。
　　第三部分
　　

7、目的:篩選肥胖兒童血漿中的差異蛋白質,為肥胖研究及PC藥物作用機制的研究提供新的靶點。
　　方法:收集肥胖兒童及健康兒童血漿,用免疫親和柱去除高豐度蛋白,用胰蛋白酶酶解蛋白,運用基于液相色譜串聯(lián)質譜無標記物(Label-free)的新技術進行蛋白定量;通過Maxquant軟件檢索人的數(shù)據(jù)庫Uniport,獲得候選蛋白信息,找出差異蛋白;并用CELLO v.2.5軟件將篩選出的差異蛋白進行亞細胞定位。
　　結果:(1)經(jīng)過對兒

8、童肥胖蛋白質組學檢測,成功發(fā)現(xiàn)了14個差異蛋白質,主要是與凝血和免疫功能相關的蛋白。其中肥胖兒童血漿中上調的免疫球蛋白有2種,下調的免疫球蛋白有3種;補體C5、C6和不同因子B、I均上調,共有4種。血紅蛋白α和β亞單位、纖維蛋白原α和β亞單位均上調,而富含組氨酸糖蛋白下調。(2)篩選出的差異蛋白中位于細胞外的蛋白質最多,高達57％,其次是細胞核29％,位于細胞質膜以及細胞外膜的蛋白質均為7％。
　　結論:(1)篩選出了肥胖的差異蛋