IL-6與BMP-7共同作用人髓核細(xì)胞對Ⅱ型膠原與TIMP-1基因的調(diào)控關(guān)系.pdf

1、背景：頸肩痛、腰腿痛主要是由于椎間盤退變引起來的，給患者及其家屬帶來沉重負(fù)擔(dān)。自1934年Mixter和Barr[1]首次采用手術(shù)治療腰椎間盤突出所致的坐骨神經(jīng)痛后，至此手術(shù)治療椎間盤突出引起的癥狀已成為主要治療方式之一；但手術(shù)治療的遠(yuǎn)期療效并不確切。隨著時代進(jìn)步和科學(xué)技術(shù)發(fā)展，人們已經(jīng)對退變椎間盤進(jìn)行了深入的研究，目前比較一致的看法是：由于髓核合成代謝和分解代謝的不平衡，改變了椎間盤的生物化學(xué)特性，誘發(fā)了其病理生理學(xué)變化，從而使退變椎

2、間盤中蛋白多糖含量和Ⅱ型膠原含量的減少，椎間盤正常的高度不能維持[2]，進(jìn)而引起脊神經(jīng)卡壓和刺激，出現(xiàn)下腰痛和腰腿痛等癥狀。雖然已經(jīng)明確了退變椎間盤的形態(tài)學(xué)和生化改變，但對多種發(fā)病因素之間的復(fù)雜相互關(guān)系仍不完全清楚，需要繼續(xù)深入地研究和探索。
　　 目的：通過對人正常椎間盤髓核細(xì)胞的培養(yǎng)，觀察髓核細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化及Ⅱ型膠原變化。探討不同濃度BMP-7與IL-6作用于體外培養(yǎng)的人髓核細(xì)胞對Ⅱ型膠原與TIMP-1基

3、因表達(dá)的影響。從基因水平觀察細(xì)胞因子在椎間盤退變過程中的相互影響，為基因治療椎間盤退變和組織工程學(xué)研究提供依據(jù)。
　　 方法：1、分離并消化人椎間盤髓核得到單個細(xì)胞并且完成原代細(xì)胞接種培養(yǎng)。2、在原代細(xì)胞融合傳至第三代后建立對照組與實(shí)驗(yàn)組[施加IL-6(100ng/mL)；IL-6(100ng/mL)+BMP-7(100ng/mL)；IL-6(100ng/mL)+BMP-7(1000ng/mL)；BMP-7(1000ng/mL)

4、因子刺激生長]。3、采用HE染色法定時于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)的變化，免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測Ⅱ型膠原的表達(dá)情況。4、應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)半定量檢測不同濃度BMP-7與IL-6作用下體外培養(yǎng)的人髓核細(xì)胞中TIMP-1和Ⅱ型膠原基因的表達(dá)量。5、經(jīng)spss13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析得出結(jié)論。
　　 結(jié)果：1、在倒置相差顯微鏡下持續(xù)觀察，10天后90％以上的細(xì)胞貼壁，原代細(xì)胞多為梭形，有偽足伸出；經(jīng)胰酶消化傳代后，細(xì)胞貼

5、壁生長速度加快；但第四代開始細(xì)胞貼壁及生長緩慢。2、HE染色細(xì)胞多為梭形，有偽足伸出，細(xì)胞核為圓形或橢圓形，圍繞細(xì)胞核，胞漿內(nèi)可見較多空泡。Ⅱ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色呈現(xiàn)陽性結(jié)果。3、應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)半定量檢測，Ⅱ型膠原及TIMP-1條帶灰度值經(jīng)方差分析，Ⅱ型膠原：F值為148.058，P=0.000；TIMP-1：F值為69.995，P=0.000，表明五組之間比較差異具有顯著性。經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)，結(jié)果顯示IL-6