shRNA LKB1慢病毒載體構(gòu)建、轉(zhuǎn)染和表達(dá)的研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩41頁未讀， 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、目的：
　　構(gòu)建針對人LKB1(liver kinase B1，或STK11 serine/threonine protein kinase11)基因的特異性短發(fā)卡RNA（short hairpin RNA，shRNA）表達(dá)的慢病毒載體，并觀察轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞Huh7后對LKB1 mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　方法：
　　根據(jù)人LKB1的基因信息，設(shè)計(jì)3條針對LKB1基因cds區(qū)的siRNA序列，同時設(shè)計(jì)1條negativ

2、e序列用于RNAi陰性對照（Negative Control,NC），組建與shRNA相對應(yīng)的4對互補(bǔ)的單鏈DNA。將合成的序列插入空載體GV115（元件順序?yàn)椋篽U6-MCS-CMV-EGFP）中，重組獲得慢病毒載體。進(jìn)行測序鑒定后，再轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞產(chǎn)生病毒液，得到的病毒液再轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞株Huh7。熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的情況，實(shí)時熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞LKB1 mRNA的表達(dá)情況，Western印跡法檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞LKB1

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論