抗病相關(guān)基因轉(zhuǎn)化馬鈴薯及其表達(dá)的初步研究.pdf

1、試驗(yàn)首先建立馬鈴薯的遺傳轉(zhuǎn)化體系，再用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將從辣椒中分離獲得的抗菌蛋白基因、非特異性脂轉(zhuǎn)移蛋白基因和親環(huán)蛋白基因所構(gòu)建的表達(dá)載體對(duì)馬鈴薯普通栽培種“津引8號(hào)”、“東農(nóng)303”、“紫花851”進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化，獲得了抗性再生植株，對(duì)所獲得的轉(zhuǎn)基因苗進(jìn)行了初步的分子鑒定，為進(jìn)一步開展轉(zhuǎn)基因抗病馬鈴薯株系的篩選奠定了基礎(chǔ)。試驗(yàn)主要結(jié)果： (1)以馬鈴薯普通栽培種“津引8號(hào)”、“紫花851”、“東農(nóng)303”的脫毒試管苗的莖段為外植

2、體，“東農(nóng)303”通過MS+1mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+0.2mg/LGA3+0.05mg/LKT誘導(dǎo)愈傷組織，Ms+1mg/L6—BA+5mg/LGA3再生不定芽；“津引8號(hào)”、“紫花851”通過MS+2mg/L6-BA+0.2mg/LNAA誘導(dǎo)愈傷組織，MS+1mg/L6—BA+5mg/LGA3再生不定芽；以1/2MS作為各馬鈴薯生根培養(yǎng)基。以75mg/L的Kan作為愈傷誘導(dǎo)和分化出芽的選擇壓；以50mg/L的Kan作

3、為生根的選擇壓；以200mg/L進(jìn)口的Cef作為脫菌抗生素。 (2)根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的馬鈴薯遺傳轉(zhuǎn)化的最佳條件是：莖段外植體在愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)2d，農(nóng)桿菌濃度OD600值為0.5，侵染10min，25℃、黑暗條件下共培養(yǎng)3d。采用前期選擇可提高工作效率。選擇生長(zhǎng)狀況良好的外植體；共培養(yǎng)時(shí)在培養(yǎng)基中添加50umol/L的AS；預(yù)培養(yǎng)和共培養(yǎng)時(shí)在培養(yǎng)基中添加2200mg/LCaCl2；均可提高轉(zhuǎn)化率。 (3)獲得5株“東

4、農(nóng)303”、3株“紫花851”、6株“津引8號(hào)”的轉(zhuǎn)抗菌蛋白基因的轉(zhuǎn)化植株；4株“東農(nóng)303”、5株“紫花851”、5株“津引8號(hào)”轉(zhuǎn)非特異性脂轉(zhuǎn)移蛋白基因的轉(zhuǎn)化植株；6株“東農(nóng)303”、3株“紫花851”、5株“津引8號(hào)”轉(zhuǎn)親環(huán)蛋白基因的轉(zhuǎn)化植株。PCR檢測(cè)表明轉(zhuǎn)化植株均擴(kuò)增出相應(yīng)的基因目的片段，證明基因已導(dǎo)入受體基因組中。 (4)初步的抗性分析表明，部分轉(zhuǎn)化體對(duì)馬鈴薯晚疫病抗性有一定的增強(qiáng)，抗菌蛋白、非特異性脂轉(zhuǎn)移蛋白和親環(huán)