局部應(yīng)用絲裂霉素C對良性膽管狹窄形成影響的實驗研究.pdf

1、膽管瘢痕狹窄多由膽管損傷、肝膽管結(jié)石和膽管炎反復(fù)發(fā)作所致，其后果可導(dǎo)致阻塞性黃疸進(jìn)而引起肝實質(zhì)損害，膽汁性肝硬化，治療頗為棘手且預(yù)后極差。目前，采用的治療方法仍以外科手術(shù)為主，對膽管再狹窄的預(yù)防措施也是圍繞手術(shù)時機(jī)、手術(shù)方式的選擇、精細(xì)的操作及吻合口大小等方面進(jìn)行經(jīng)驗性總結(jié)。有報道應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素預(yù)防膽管瘢痕增生防止膽管再狹窄，但具體療效尚缺乏確定的結(jié)果。因此，對膽管瘢痕狹窄形成機(jī)理和防治方法的深入研究，具有非常重要的意義。
　

2、　 許多抗纖維化的藥物證實在增生性疾病中有效，絲裂霉素C(Mitomycin C，MMC)是由頭狀鏈霉菌分離出來的抗腫瘤抗生素，目前認(rèn)為，MMC對于成纖維細(xì)胞增殖的抑制作用，是氟尿嘧啶的100倍，并具有時間依從性，作用時間可達(dá)到無限期抑制增生，同時與劑量密切相關(guān)，大劑量時可以成為不可逆性抑制。已明確，局部應(yīng)用MMC對瘢痕的形成具有預(yù)防和治療的作用，并在眼科、整形外科、耳鼻喉、泌尿、骨科及上消化道等領(lǐng)域的瘢痕預(yù)防和消除中廣泛應(yīng)用，效果頗

3、佳。
　　 目的:
　　 探討MMC對雄性SD大鼠膽總管電凝損傷后良性狹窄形成預(yù)防的作用，研究其在膽管良性狹窄疾病中的應(yīng)用可行性，為臨床防治膽管狹窄尋求一條新的途徑。
　　 方法:
　　 48只雄性SD大鼠(體重180-200g)用于研究。其中40只隨機(jī)分成4組：假手術(shù)組、膽道狹窄模型組、電凝+低濃度藥物組、電凝+高濃度藥物組。8只做為藥物空白對照組。
　　 動物麻醉后，將所有大鼠先于近肝門膽總管

4、分叉下分離膽管周圍軟組織約1cm，假手術(shù)組關(guān)腹。膽道狹窄模型組大鼠，采用電凝鉤8J能量于分叉下約0.5cm處電凝膽總管。藥物組(電凝+藥物1組：MMC濃度0.4mg/ml；電凝+藥物2組：MMC濃度0.6mg/ml)繼而于膽管損傷處采用完全浸潤MMC1毫升的明膠海綿(1×1×0.5cm3)包繞，5分鐘后取出明膠海綿，藥物空白對照組采用電凝處理同膽道狹窄模型組大鼠，繼而于膽管損傷處采用完全浸潤注射用水的1毫升的明膠海綿(1×1×0.5cm

5、3)包繞，5分鐘后取出明膠海綿。術(shù)后繼續(xù)飼養(yǎng)15天處死。
　　 記錄所有大鼠術(shù)前及術(shù)后體重、進(jìn)食和精神狀況以及黃染，抽取門靜脈學(xué)檢測血常規(guī)、肝功能等指標(biāo)，并記錄肝臟和腹水情況。取膽管組織采用10％福爾馬林固定后石蠟包埋并制成切片。對各組動物的膽管組織進(jìn)行HE染色、Masson三色染色檢測膽管膠原纖維構(gòu)筑形態(tài)，測定膽管壁厚度，并進(jìn)行顯微鏡檢查。采用免疫組化法檢測轉(zhuǎn)化生長因子(transforming growth factor-β

6、，TGF-β)，α-平滑肌肌動蛋白(α-smoothmuscle actin，α-SMA)，增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)，血管內(nèi)皮生長因子(vascular epithelial growth factor,VEGF)，并記錄毛細(xì)血管增生情況。所有指標(biāo)在各組間的差異采用單因素方差分析。
　　 結(jié)果:
　　 膽道狹窄模型組和藥物空白對照術(shù)后15天表現(xiàn)為阻塞

7、性黃疸，血漿膽紅素和谷丙轉(zhuǎn)氨酶均明顯高于假手術(shù)組。用藥1組和2組，血漿膽紅素升高程度均低于單純膽道狹窄模型組，且用藥2組低于用藥1組。術(shù)后15天血常規(guī)檢查顯示，膽道狹窄模型組白細(xì)胞高于假手術(shù)組(P＜0.05)，紅細(xì)胞和血小板均無明顯差異。
　　 膽道狹窄模型組和藥物空白對照組損傷部位存在明顯膽管狹窄，狹窄部位以上膽管擴(kuò)張明顯，直徑為假手術(shù)組的5倍以上，部分大鼠伴有腹水。用藥組膽總管輕度狹窄，狹窄部位以上膽管直徑為正常管徑的1～3

8、倍，無腹水表現(xiàn)。
　　 病理檢查顯示：膽道狹窄模型組膽管損傷部位組織，成纖維細(xì)胞增生活躍，膽管壁顯著纖維化增厚，炎性細(xì)胞廣泛浸潤。Masson三色染色見膽管粘膜下大量膠原纖維增生，排列致密紊亂。膽道狹窄模型組膽管壁厚度明顯高于假手術(shù)組(5.88±0.67mm vs2.76±0.22 mm，P＜0.01)。用藥組則膽管壁增厚不明顯，用藥2組膽管壁增厚與假手術(shù)組無顯著差異(3.12±0.45 vs2.76±0.22，P＞0.05)。

9、
　　 免疫組化結(jié)果顯示：(1)TGF-β、α-SMA、PCNA陽性細(xì)胞數(shù)，藥物處理組與空白對照組、模型組、假手術(shù)組之間均有差異顯著(P＜0.01)，并且用藥1組及用藥2組之間也有顯著差異(P＜0.01)；(2)VEGF陽性積分和微血管密度的檢測結(jié)果，膽道狹窄模型組和用藥組明顯高于假手術(shù)組(P＜0.01)，模型組和藥物空白對照組結(jié)果相近；(3)微血管密度的檢測結(jié)果，膽道狹窄模型組則明顯低于用藥組(P＜0.01)，模型組和藥物空白

10、對照組結(jié)果相近，用藥1組及用藥2組之間無顯著差異。
　　 結(jié)論:
　　 (1)通過電凝損傷膽管法可以建立大鼠良性膽管狹窄模型，該模型主要病理變化是膽管壁成纖維細(xì)胞增殖和膠原纖維過度增生，同時伴TGF-β、α-SMA、PCNA、VEGF等明顯升高；
　　 (2)局部短期應(yīng)用MMC可以抑制膽管成纖維細(xì)胞的過度增殖和膠原纖維的交聯(lián)，對膽管良性狹窄起到一定預(yù)防作用；但對大鼠術(shù)后體重、血常規(guī)和肝功能無毒副作用；(3)0.6