肺鱗癌、腺癌中RhoC及其調(diào)節(jié)因子RhoGDIα的表達(dá)研究.pdf

1、目的：RhoC是小分子量G蛋白超家族中Rho亞族的成員之一，是一種在活性的GTP形式和非活性的GDP形式之間循環(huán)的GTP酶，參與細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)，肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的調(diào)節(jié)等。近年的研究顯示RhoC在許多癌組織中過表達(dá)，而且與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。RhoGDIα被認(rèn)為是RhoC的負(fù)性調(diào)節(jié)因子，它與GDP形式的RhoC結(jié)合后，使其滯留于胞漿中，阻止其與膜上的GTP結(jié)合，從而抑制了RhoC的活性，在對(duì)一些腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)RhoGDIα表達(dá)或升高

2、或降低。在肺癌中RhoC與RhoGDIα究竟是如何表達(dá)的，它們與臨床病理因素及預(yù)后間的關(guān)系怎樣尚不清楚。為了探討RhoC和RhoGDIα在肺鱗癌、腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，研究了二者在肺鱗癌、腺癌中的表達(dá)情況，分析它們與臨床病理因素及預(yù)后之間的關(guān)系。 材料與方法: 1、免疫組織化學(xué)S-P法 檢測100例原發(fā)性肺鱗癌、腺癌及癌旁正常肺組織，均來自中國醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2001-2006年外科手術(shù)切除的標(biāo)本，其中52例

3、標(biāo)本有完整的術(shù)后隨訪記錄。所有患者術(shù)前均未接受過任何放療或化療。 標(biāo)本經(jīng)中性福爾馬林固定，石蠟包埋，制成4μm切片，經(jīng)脫蠟、脫苯、水化后采用鏈菌素抗生物素蛋白.過氧化物酶免疫組化(S-P)法檢測RhoC蛋白(1∶50)和RhoGDIα蛋白(1∶50)表達(dá)，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。結(jié)果判定∶RhoC和RhoGDIα均以腫瘤細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達(dá)，以染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)比例評(píng)定陽性表達(dá)。光鏡下每張切片選取癌細(xì)胞較多

4、的5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。著色強(qiáng)度分級(jí)為∶無色(一)為0分、淺黃色(+)為1分、黃色及更深顏色(++)為2分。陽性細(xì)胞數(shù)分級(jí)為∶≤50％為0分、51％-75％為1分、>75％為2分。兩項(xiàng)得分相乘結(jié)果≥2分為陽性病例。 2、Western Blot采用60例新鮮原發(fā)性肺鱗癌、腺癌及相應(yīng)的距癌灶旁5cm以上正常肺組織，均來自中國醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2004-2006年行外科手術(shù)切除的標(biāo)本提取蛋白，考馬斯亮藍(lán)法進(jìn)行蛋白

5、定量。取等量蛋白，進(jìn)行SDS-PAGE電泳和轉(zhuǎn)印，一抗(RhoCl∶100、RhoGDIαl∶200、β-actinl∶500)和辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗(1∶1500)孵育，DAB顯色。以β-actin為內(nèi)對(duì)照，結(jié)果判定∶PVDF膜上出現(xiàn)灰色條帶，并對(duì)條帶進(jìn)行灰度值測定。 3、應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論: 1、RhoC、RhoGDIα在肺鱗癌、腺癌中的蛋白表達(dá)明顯高于