體外轉(zhuǎn)染癌基因的骨髓基質(zhì)干細胞分化為原發(fā)性肝癌的研究.pdf

1、背景:原發(fā)性肝細胞癌(HCC)是我國常見的惡性腫瘤之一，其死亡率在所有惡性腫瘤中居第三位。長期以來，人們一直在尋找HCC的細胞源和病因，試圖從HCC的發(fā)病機制中找到一種行之有效的預(yù)防和治療手段。在HCC的細胞源研究中，主要有兩種觀點：其一為肝內(nèi)干細胞即卵圓細胞的異常分化引起；其二為成熟的肝細胞去分化而致。兩種觀點各有一定的支持依據(jù)。Sell-s在煙曲霉素B1(FB1)對小鼠的誘癌實驗中發(fā)現(xiàn)，肝組織內(nèi)首先出現(xiàn)大片肝細胞壞死，卵圓細胞增生，

2、卵圓細胞數(shù)量快速增加，在卵圓細胞中出現(xiàn)癌基因c-myc和AFPmRNA陽性反應(yīng)，TGF-α和TGF-BmRNA也呈陽性反應(yīng)，并呈逐漸增強的趨勢，以后卵圓細胞數(shù)量逐漸減少，致癌基因的表達也隨之下降，噬堿性肝細胞結(jié)節(jié)形成，最后形成癌結(jié)節(jié)，認為卵圓細胞在致癌因素的誘導(dǎo)下，可直接異常分化成癌細胞。由此，許多學(xué)者認為肝內(nèi)卵圓細胞才是HCC的源細胞。Johnson-JD等在研究甲基丁香油酚這一致癌物質(zhì)對大鼠各臟器的損傷作用時發(fā)現(xiàn)大鼠出現(xiàn)了肝癌、膽管

3、癌、神經(jīng)內(nèi)分泌惡性腫瘤、含鐵血黃素沉著癥、幼紅細胞增多癥、骨髓增生等多種疾病。同時有文獻報道在人類含鐵血黃素沉著癥的患者中，HCC為高發(fā)人群。一個致癌物質(zhì)能誘發(fā)多臟器癌變，究其原因，可能在于骨髓干細胞，基因變異的干細胞異常分化，隨血液循環(huán)到各臟器而導(dǎo)致多臟器癌變。如果骨髓干細胞基因變異可導(dǎo)致多臟器的癌變的假設(shè)正確的話，則骨髓干細胞就應(yīng)該是肝內(nèi)卵圓細胞的母細胞。Petersen-BE等先用大劑量放射線破壞雌性Ⅰ大鼠骨髓干細胞，然后行同類雄

4、性大鼠骨髓移植，術(shù)后喂食2-乙酰氨基芴(2-AAF)以抑制肝細胞的增生；術(shù)后第13天發(fā)現(xiàn)肝組織內(nèi)有少量的肝細胞和卵圓細胞呈Y染色體陽性表達。Malcolm-RA等對接受男性骨髓細胞移植的女性患者的肝組織進行了病檢，發(fā)現(xiàn)有0.5％-2％肝細胞Y染色體呈陽性表達。以上研究證實肝組織內(nèi)肯定有部分卵圓細胞來自骨髓干細胞。由此，許多學(xué)者認為肝內(nèi)卵圓細胞才是HCC的源細胞。而同時也有研究顯示，卵圓細胞表達某些骨髓干細胞的相關(guān)性抗原，卵圓細胞可能來源

5、于骨髓干細胞。這些實驗證據(jù)使人們聯(lián)想到是否骨髓干細胞才是HCC的源細胞。在這方面，目前尚未有系統(tǒng)研究的報告，為此，本課題得到了廣東省自然科學(xué)基金支持。 目的:分離純化一個類群的骨髓干細胞，在體內(nèi)、外觀察轉(zhuǎn)染癌基因的骨髓干細胞分化和在大鼠肝臟定居情況，探討HCC的骨髓干細胞源性，為HCC的發(fā)生、發(fā)展的干細胞源性提供理論依據(jù)。 結(jié)論: 1.采用梯度離心的方法分離可獲得純度較高的骨髓間質(zhì)于細胞。每天更換培養(yǎng)液比每隔3-

6、4天換液一次更有利于MSC的增殖和形成形態(tài)均一的細胞集落。 2.大鼠骨髓基質(zhì)干細胞與肝細胞共同培養(yǎng)，可被誘導(dǎo)分化為肝細胞。 3.骨髓間充質(zhì)干細胞在較高濃度的肝細胞生長因子的誘導(dǎo)下，可分化為肝細胞。 4.大鼠骨髓間質(zhì)干細胞，經(jīng)不同途徑移植均可于同種異體大鼠肝臟內(nèi)定居。植入的MSCs是肝臟卵圓細胞的細胞來源，并且可以分化為成熟的肝細胞。干細胞定居于肝臟的聚集時間、數(shù)量與肝臟是否受損傷關(guān)系密切，與移植途徑無關(guān)。