高效液相色譜—串聯(lián)質譜法測定血清中游離和結合型膽汁酸的方法學研究和臨床應用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的： 1．建立高效液相色譜一串聯(lián)質譜(HPLC-MS／MS)同時測定血清中游離和結合型膽汁酸的方法。 2．用HPLC—MS／MS法測定正常孕婦、輕度和重度妊娠期肝內膽汁淤積癥(intrahepaticcholestasisofpregnancy，ICP)患者血清中膽汁酸，建立ICP的膽汁酸譜，用于ICP的診斷和分度診斷。 方法： 1．色譜條件：色譜柱：WatersAtlantisC18(3．9×150m

2、lil，5pm)；柱溫：25℃；流速：1ml／min，分流比為1：4；流動相A：含5mmol／L醋酸銨和0．01％甲酸水溶液，B：含5mmol／L醋酸銨和0．01％甲酸甲醇溶液，梯度洗脫；用三級四極桿串聯(lián)質譜(MS／MS)進行檢測，離子化模式為ESI一，采用多反應監(jiān)測(MRM)模式，外標標準曲線法定量；檢測時間10min。 2．用ChromabondC18ec固相小柱萃取血清樣品。 3．用HPLC—MS／MS法測定53例

3、正常孕婦，21例輕度ICP患者，22例重度ICP患者的血清膽汁酸。 結果： 1．膽汁酸的線性范圍為O．10～100．0gmol／L，r為0．9990～0．9999，具有良好的相關性，最低檢測限0．00l～0．006gmol／L。該方法的日內變異系數均小于3．O％，日間變異系數均不超過5．94％，平均回收率為90．0～¨0．0％。 2．與正常孕婦組相比，輕度ICP組GCA和TCA顯著增高，GCDCA極顯著增高，而U

4、DCA顯著降低；重度ICP組TUDCA顯著增高，GCA、GCDCA、TCA和TLCA極顯著增高，而GDCA顯著降低，TCDCA和TDCA極顯著降低。與輕度ICP組相比，重度ICP組TUDCA顯著增高，GCA、GCDCA和TCA極顯著增高。 結論： 1．本研究建立的血清膽汁酸的HPLC—MS／MS分析法，能實現(xiàn)血清中微量的游離和結合型膽汁酸的測定，該方法準確、靈敏、快速、特異，適合于實驗室研究和臨床常規(guī)檢測。 2．

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