靶向活化Ⅱ型大麻素受體抑制RA炎癥性骨侵蝕的實驗研究.pdf

1、目的：觀察Ⅱ型大麻素受體（cannabinoid receptor2，CB2）在類風濕性關節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）疾病進程中的表達變化，分析CB2選擇性激動劑JWH-133對RA炎癥性骨侵蝕的治療作用。
　　方法：雄性 DBA/1小鼠50只，采用隨機數(shù)字表法分為5組，即正常對照組（Control）、模型組（Vehicle）、JWH-133低劑量治療組（L-JWH-133）、JWH-133高劑量治療組（

2、H-JWH-133）和陽性對照組（甲氨蝶呤治療組，MTX），每組10只。采用牛Ⅱ膠原誘導的小鼠CIA模型，藥物治療組于初次免疫后第28天（D28）經(jīng)腹腔分別給予JWH133（1mg/kg/d和10mg/kg/d）和MTX（20mg/kg，每周2次），連續(xù)給藥6周。模型組經(jīng)腹腔注射生理鹽水0.1ml/kg/d，空白組小鼠常規(guī)飼養(yǎng)，不予處理。分別觀察各組小鼠的體重、后足足掌厚度變化，并對關節(jié)炎的腫脹程度進行評分。Micro-CT檢查評估骨組

3、織破壞程度，H&E染色評估滑膜增生和炎性細胞浸潤程度，番紅O染色檢測軟骨破壞程度，抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色檢測成熟破骨細胞，免疫組織化學染色檢測CB2、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素（interleukin,IL）-1β、白介素-6（IL-6）、基質金屬蛋白酶-3（matrix metallo proteinases-3, MMP-3）、環(huán)氧化酶-2（Cyclooxyge

4、nase-2,COX-2）、誘導性一氧化氮合酶（hadueed-nitric oxide syathase,iNOS）以及核因子-κB受體活化因子配體（receptor activators of nuclear factor-kappa B ligand，RANKL）和骨保護素（osteoprotegerin,OPG）的表達變化。
　　結果：DBA/1小鼠初次免疫21天（D21）開始，體重逐漸下降，最低為（D35，17.99±1

5、.44）g，明顯低于Control組（D35，21.81±1.23）g比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）給予JWH-133后，小鼠體重逐漸增加，與Vehicle組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。CIA模型小鼠后足于D21開始出現(xiàn)腫脹，靶向激活CB2后小鼠足掌厚度開始減少，H-JWH-133組D42足掌厚度為（2.52±0.12）mm與Vehicle組（2.63±0.07）mm比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；D42時H-

6、JWH-133組關節(jié)炎評分（13.6±1.14）與Vehicle組（15.6±0.55）比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。Micro-CT掃描結果顯示Vehicle組骨質破壞嚴重，關節(jié)結構消失，經(jīng)選擇性CB2受體激動劑治療后骨質破壞逐漸減輕，關節(jié)結構得到恢復；Control組骨體積（BV）、骨體積分數(shù)（BV/TV）、骨面積分數(shù)（BS/BV）、骨小梁厚度（Tb.Th）分別為（5.90±0.12）mm3、（32.52±0.89）％、（

7、9.26±0.62） mm、（0.36±0.02）mm；Vehicle組為（3.77±0.22）mm3、（17.81±0.95）%、（17.78±1.03） mm、（0.21±0.01）mm，H-JWH-133組為（3.91±0.23）mm3、（19.45±0.98）%、（16.82±0.56） mm、（0.24±0.01）mm；H-JWH-133組為（5.22±0.19）mm3、（24.94±1.12）%、（11.81±0.60） m

8、m、（0.30±0.02）mm，與Vehicle組相比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。H&E染色顯示Vehicle組滑膜組織滑膜組織顯著增生，大量炎癥細胞浸潤，靶向活化CB2后滑膜組織炎癥明顯減輕。番紅O染色顯示Vehicle組軟骨細胞大量壞死，局部軟骨層完全消失，H-JWH-133組軟骨細胞顯著增多，軟骨層結構明顯恢復。TRAP染色結果顯示，CIA模型組關節(jié)有大片紫紅色區(qū)域，H-JWH-133治療后破骨細胞數(shù)量明顯減少。免疫組織化學

9、染色結果顯示CB2在CIA小鼠的滑膜組織和骨組織均有表達；Vehicle組TNF-?、IL-1?、IL-6、MMP-3、COX-2和iNOS的表達明顯增高，選擇性CB2受體激動劑治療后上述因子表達顯著降低；H-JWH-133組RANKL表達強度較Vehicle組顯著降低，OPG表達則高于Vehicle組。
　　結論：CB2選擇性激動劑JWH-133能抑制炎性細胞浸潤，減少炎性因子分泌；JWH-133能下調RANKL表達，促進OPG