厄羅替尼對含不同EGFR變異的人肺癌細胞以及基質細胞的抑制實驗研究.pdf

1、背景與目的:
　　肺癌是世界上癌癥致死的首要原因，其中非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)占肺癌的80％左右。即便采用新一代含鉑兩藥聯(lián)合化療，晚期NSCLC患者的中位生存期也只有8-10個月左右。EGFR-TKI讓人們在肺癌治療方面看到了曙光，但仍有25％-30％的攜帶EGFR活化突變NSCLC患者對EGFR-TKIs原發(fā)耐藥。此外，幾乎所有含EGFR突變且對吉非替尼或厄洛替尼治療有效的

2、NSCLC患者最終仍會產(chǎn)生繼發(fā)耐藥[5]。因此，了解這類靶向藥物的耐藥機制對如何克服耐藥或耐藥后如何選擇治療就顯得尤為重要。HGF是除EGFRT790M突變和MET擴增外又一種涉及到原發(fā)性及繼發(fā)性耐藥的分子機制。本實驗旨在明確各種類型肺癌細胞及腫瘤微環(huán)境中的基質細胞在EGFR-TKI作用下其細胞生長抑制情況以及宿主微環(huán)境中各種生長因子（如HGF、TGF-α、IGF1和EGF）的表達變化，為后續(xù)開展EGFR耐藥機制研究提供前期理論依據(jù)。<

3、br>　　方法:
　　1.應用MTT法測定EGFR敏感突變型肺癌細胞PC9的厄洛替尼的耐藥指數(shù)IC50。
　　2.應用ELISA法檢測單獨培養(yǎng)細胞(EGFR敏感突變型肺癌細胞PC9、EGFR耐藥突變型肺癌細胞H1975、EGFR野生型肺癌細胞A549、腫瘤基質細胞MRC5)上清液中HGF、TGF-α、IGF1和EGF在加或不加厄洛替尼(濃度為方法1中所測IC50)情況下的表達含量。
　　結果:
　　1.MTT法實

4、驗結果顯示，PC9細胞對厄洛替尼敏感，與對照組（不加藥組）相比，隨著厄洛替尼濃度增加，PC9細胞生長抑制率也相應提高，呈劑量依賴性。最終實驗測得IC50為3.33μmol，P＜0.01，與對照組差異有統(tǒng)計學意義。
　　2.加入厄洛替尼后，A549/PC9/MRC-5細胞上清中TGF-α含量均增加，有統(tǒng)計學意義;H1975細胞上清中TGF-α含量下降，且無統(tǒng)計學意義。
　　3.加入厄洛替尼后，H1975/PC9兩組細胞上清中表

5、達IGF-1增加，前者無統(tǒng)計學意義;A549/MRC-5兩組細胞在加藥后上清中表達的IGF-1減少，且有統(tǒng)計學意義。
　　4.加入厄洛替尼后，H1975細胞、A549細胞、PC-9細胞及MRC-5細胞，表達EGF含量與未加藥對照組比較未見明顯變化，均表達極少量EGF，其差異無統(tǒng)計學意義。
　　5.加入厄洛替尼后，H1975及A549細胞表達HGF分別增加和減少，但差異無統(tǒng)計學意義;PC-9及MRC-5細胞加入藥后表達HGF分

6、別增多和減少，且差異有統(tǒng)計學意義。
　　結論:
　　1.本實驗中提示四種細胞加入厄洛替尼前后的上清液中均表達相對極少量的EGF，且無統(tǒng)計學意義，除外實驗操作過程可能出現(xiàn)的誤差外，考慮EGF自分泌或旁分泌作用在肺癌耐藥中作用可能不大。
　　2.與其他三種細胞因子比較，四種細胞系均表達相對較高的HGF，提示HGF在細胞各種生物活性中可能起到更大的作用。PC-9/MRC-5細胞系在加入厄洛替尼前后表現(xiàn)出有統(tǒng)計學意義的變化，而