鐵離子腦室注射對腦損傷作用的實驗研究.pdf

1、鐵離子是血紅蛋白的降解產(chǎn)物之一，生理狀態(tài)下鐵離子在腦內(nèi)分布廣泛，在腦內(nèi)氧的運輸、電了傳遞、神經(jīng)遞質(zhì)和髓鞘合成等功能活動中起重要作用。腦組織中鐵離子的正常代謝主要依賴于細胞對其有效的吸收、運轉(zhuǎn)和儲存的平衡。
　　 鐵離子平衡紊亂，尤其鐵離子的過量蓄積，產(chǎn)生神經(jīng)毒性作用，而觸發(fā)一系列病理反應(yīng)。研究表明，多種神經(jīng)退行性疾病都與鐵離了的異常增高有關(guān)。在阿爾茨海默病病人腦組織中多個區(qū)域鐵離了含量明顯增高，鐵離了在神經(jīng)細胞內(nèi)的積聚與其特征性

2、的病理改變老年斑的形成有關(guān)；在帕金森氏癥病人腦中同樣出現(xiàn)鐵離子代謝紊亂，尤其是黑質(zhì)內(nèi)鐵離子異常聚集，被認為是多巴胺能神經(jīng)元死亡的原因之一。
　　 腦出血發(fā)生后，腦血腫內(nèi)的紅細胞溶解，血紅蛋白降解，釋放大量的鐵離子。離體實驗證實鐵離子干預體外培養(yǎng)的神經(jīng)細胞，可以促使神經(jīng)元發(fā)生凋亡，但在體情況下鐵離了過度升高對神經(jīng)組織的影響如何，研究尚不完善。鑒于腦出血后腦組織損傷多種因素參與致病的復雜性，本實驗選擇單獨使用鐵離子側(cè)腦室注射，觀察研

3、究其對腦組織的損傷作用，并探討其作用機制。
　　 材料與方法：
　　 1、動物模型制作及分組
　　 C57BL/6小鼠30只，體重22-25g，隨機分成對照組和FeCl3組。分別將3μl的生理鹽水和3μl FeCl3·6H2O溶液立體定向注入小鼠右側(cè)側(cè)腦室。
　　 2、行為學觀察
　　 分別在注射前及注射后的第1d、3d、5d、7d，按照Nss評分方法(Neurological Severity

4、Score)檢測，用于小鼠神經(jīng)功能評判。
　　 3、組織取材
　　 成模小鼠7天后斷頭取腦，5只小鼠取右側(cè)大腦半球，用于檢測小鼠腦組織含水量；其余10只小鼠取右側(cè)大腦半球額葉組織，用于組織學觀察。
　　 4、染色
　　 ①HE染色：光鏡下觀察額葉皮質(zhì)的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)。
　　 ②尼氏染色：小鼠海馬石蠟切片1％焦油紫水染色，光鏡下分別對海馬CA1和CA3區(qū)進行觀察，并計數(shù)神經(jīng)細胞。
　　 ⑧免疫

5、熒光雙標：小鼠額葉皮質(zhì)進行GFAP、caspase-3或NeuN、caspase-3免疫熒光雙標，觀察分析神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞凋亡因子caspase-3表達情況。
　　 實驗結(jié)果：
　　 1、小鼠神經(jīng)功能損傷評分(Nss)顯示，F(xiàn)eCl3組小鼠神經(jīng)功能評分造模術(shù)后1天最高，以后逐漸下降，各時間點均明顯高于對照組(P＜0.01)。
　　 2、腦組織含水量測定，對照組小鼠大腦半球含水量未見明顯升高，F(xiàn)eCl3組小鼠造

6、模術(shù)后腦組織含水量明顯高于對照組。
　　 3、HE染色結(jié)果顯示，F(xiàn)eCl3組小鼠額葉皮質(zhì)出現(xiàn)水腫病理表現(xiàn)，腦細胞水腫，部分神經(jīng)元壞死液化。
　　 4、Nissl染色結(jié)果顯示，F(xiàn)eCl3組小鼠海馬CA1和CA3區(qū)神經(jīng)元缺失。
　　 5、免疫熒光雙標結(jié)果顯示，F(xiàn)eCl3組小鼠額葉皮質(zhì)星形膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元數(shù)量明顯減少，同時星形膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元內(nèi)凋亡因子caspase-3的表達明顯升高。
　　 結(jié)論：