去鐵胺對腦出血后繼發(fā)性腦損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：腦出血（intracerebral hemorrhage,ICH）是一種高度威脅人類健康的疾病，是神經(jīng)系統(tǒng)的常見病，且致殘致死率很高。多數(shù)幸存者殘留不同程度的神經(jīng)功能缺損。至今關(guān)于腦出血的周圍水腫的研究報導(dǎo)仍未取得突破性的進(jìn)展。研究發(fā)現(xiàn)在腦出血病變中存在嚴(yán)重的鐵超載現(xiàn)象,而這種鐵超載主要來自腦出血血腫內(nèi)破碎紅細(xì)胞產(chǎn)生的多種降解產(chǎn)物。血腫周圍腦組織的鐵離子能夠通過一系列的氧自由基的激活造成神經(jīng)損傷，也可以誘發(fā)炎癥反應(yīng)，是腦出血后引起

2、的腦組織損傷的重要因素之一。在血腫部位及周圍區(qū)域可產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，釋放含鐵血黃素和紅細(xì)胞的毒性物質(zhì)、中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等。因此，局部鐵離子的清除，有可能通過降低炎性反應(yīng)，減少繼發(fā)性的神經(jīng)損傷。去鐵胺是一種對鐵離子有高度親和力的金屬絡(luò)合物，可快速有效的與鐵離子結(jié)合，進(jìn)而排出體外，故可降低血腫部位鐵離子的含量，從而降低腦出血后繼發(fā)性的神經(jīng)損傷。膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）是一種中間纖維蛋白，在星形膠質(zhì)細(xì)胞中有特異性的表達(dá)。目前的研究發(fā)現(xiàn)，中

3、樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷時可引起GFAP水平的明顯升高，表明這種特異性的中間纖維蛋白在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷時發(fā)揮著重要作用。因此，GFAP可作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷及預(yù)后的一種特異性標(biāo)志物。生長相關(guān)蛋白-43（GAP-43）是一種高度親水性的蛋白，在神經(jīng)元中有特異且唯一的表達(dá)，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷時有顯著變化，因此可作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷程度及判斷預(yù)后的指標(biāo)之一。該實(shí)驗(yàn)主要研究在于腹腔注射DFA對大鼠ICH后血腫周圍鐵離子濃度的變化、GFAP及GAP-43表

4、達(dá)情況的影響，為臨床治療ICH提供一定的理論依據(jù)。
　　方法：取體重范圍為250-300g，健康雄性SD大鼠144只，隨機(jī)分為三個組：去鐵胺治療組、腦出血模型組和假手術(shù)組，每組48只。將 SD大鼠用4％水合氯醛麻醉，應(yīng)用立體定位儀固定，于大鼠尾部取60μl非肝素化自體動脈血，右側(cè)尾狀核內(nèi)注入，制備大鼠ICH模型。2小時后以Longa評分為準(zhǔn)則選取合格大鼠，去鐵胺治療組于術(shù)后2小時開始腹腔注射 DFA(100mg/kg)[1],每1

5、2h注射一次，累計(jì)注射7d。腦出血模型組、假手術(shù)組不給于特殊藥物處理。于ICH后2h、6h、1d、2d、3d、5d、7d進(jìn)行大鼠ICH損傷后的神經(jīng)功能障礙評分。分別于1d、3d、7d、14d三個時間點(diǎn)各取6只大鼠解剖取腦，測濕重及干重，計(jì)算腦組織含水量。于給藥后1d、3d、7d、14d取大鼠血腫周圍腦組織進(jìn)行鐵離子濃度測定。分別于1d、3d、7d、14d四個時間點(diǎn)各取6只大鼠解剖取腦，切取血腫周圍腦組織，每個腦組織選取血腫周前、中、后部

6、位切片，各切三張。免疫組化方法進(jìn)行觀察GFAP、GAP-43，在高倍鏡視野下每張片子取6張圖片并計(jì)算陽性表達(dá)。用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠腦組織水含量的變化
　　腦出血模型組、去鐵胺治療組均在1d時便已升高，3d時達(dá)高峰，7d有所降低，14d時降至更低。去鐵胺治療組在1d和7d時腦組織含水量無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）,假手術(shù)組在各時間點(diǎn)腦組織含水量無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。各

7、組于14d時腦組織水含量無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。余各組的腦組織含水量在各時間點(diǎn)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。
　　2.大鼠神經(jīng)功能缺損情況
　　腦出血組模型組的神經(jīng)功能評分顯著升高，于出血后1d達(dá)高峰，隨后于出血損傷后的1至3d緩慢下降，3d后穩(wěn)定在高于假手術(shù)組的水平。去鐵胺治療組在給藥后2d開始低于腦出血模型組。假手術(shù)組各個時間點(diǎn)的評分都顯著低于腦出血模型組和去鐵胺治療組。
　　3.大鼠腦組織鐵離子濃度的變化
　　

8、腦出血組模型組和去鐵胺治療組在1d時已有增高，至7d時達(dá)高峰，14d時降低，假手術(shù)組的鐵離子濃度始終維持在生理水平。去鐵胺治療組鐵離子濃度在給藥后3d開始低于腦出血組。腦出血組模型組1d和14d結(jié)果比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），去鐵胺治療組在1d和14d時結(jié)果比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。腦出血組模型組和去鐵胺治療組在1d時結(jié)果比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。余各組在各時間點(diǎn)比較結(jié)果均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

9、
　　4.大鼠GFAP表達(dá)的變化
　　假手術(shù)組動物腦組織的GFAP表達(dá)在各時間點(diǎn)均保持在生理水平，腦出血組的GFAP表達(dá)于ICH后3d顯著增加，于ICH后7d達(dá)高峰，ICH后14d有所下降。去鐵胺治療組鐵離子濃度在給藥后3d開始低于腦出血組。腦出血模型組的蛋白表達(dá)水平在3d和14d時結(jié)果比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。去鐵胺治療組、腦出血組在1d時結(jié)果無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。剩余各組各時間點(diǎn)間表現(xiàn)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差

10、異（P＜0.05）。
　　5.大鼠GAP-43表達(dá)的變化
　　假手術(shù)組動物腦組織的GAP43表達(dá)在各時間點(diǎn)均保持在生理水平，結(jié)果比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），腦出血模型組、去鐵胺治療組的GAP-43表達(dá)于ICH后1d便已增加，于ICH后7d達(dá)高峰，ICH后14d有所下降。去鐵胺治療組鐵離子濃度在給藥后3d開始低于腦出血組。腦出血模型組和去鐵胺治療組的蛋白表達(dá)水平在1d時結(jié)果比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。剩余各

11、組各時間點(diǎn)間表現(xiàn)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.大鼠自體尾動脈血顱內(nèi)注入可成功制作腦出血模型，且成功率較高。
　　2.大鼠ICH后血腫部位鐵離子濃度與腦組織水含量不呈正相關(guān)。
　　3.大鼠ICH后血腫周圍GFAP的表達(dá)受腦出血局部壞死組織的影響，且與鐵離子的濃度呈正相關(guān)關(guān)系。
　　4.大鼠 ICH后血腫周圍 GAP-43的表達(dá)受血腫部位鐵離子濃度的影響，且其表達(dá)隨鐵離子的濃度的升高而增