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文檔簡(jiǎn)介
1、腦出血后血紅蛋白降解釋放的鐵離子在急性期過(guò)后仍長(zhǎng)期滯留于腦內(nèi)。本研究擬觀察腦出血后潴留于腦內(nèi)的鐵離子是否對(duì)腦組織產(chǎn)生遲發(fā)性損傷,并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行探索。
研究方法:
本研究分兩部分。第一部分:通過(guò)大鼠自體血基底節(jié)模型和大鼠海馬氯化亞鐵注射模型,觀察是否存在遲發(fā)性腦萎縮并進(jìn)行FJC染色檢測(cè)建模后2周時(shí)是否仍存在神經(jīng)元變性。同時(shí),在不同時(shí)間點(diǎn)應(yīng)用Perl's染色觀察鐵離子腦內(nèi)潴留情況,應(yīng)用OX-6染色觀察小膠質(zhì)細(xì)胞激
2、活情況,運(yùn)用磷酸化P65染色觀察NF-kB活化情況,運(yùn)用鐵蛋白/OX-42復(fù)染觀察腦出血后鐵蛋白在小膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)情況。并觀察鐵離子螯合和米諾環(huán)素治療對(duì)遲發(fā)性腦萎縮和神經(jīng)功能的影響。第二部分:進(jìn)行小膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元培養(yǎng)。通過(guò)OX-6染色和磷酸化P65染色分別觀察Fe2+對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞的激活作用和對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞NF-kB活化的影響。通過(guò)Fe2+直接處理神經(jīng)元和Fe2+處理小膠質(zhì)細(xì)胞后所得上清再處理神經(jīng)元觀察Fe2+對(duì)神經(jīng)元的作用途徑,明確小
3、膠質(zhì)細(xì)胞在其中的作用,并給予米諾環(huán)素進(jìn)行干預(yù)治療。
結(jié)果:
大鼠腦出血模型中12周仍存在鐵離子潴留和出血側(cè)鐵蛋白染色增強(qiáng),復(fù)染提示腦出血后4周后鐵蛋白輕/重鏈主要表達(dá)于小膠質(zhì)細(xì)胞。腦出血后2周時(shí),出血側(cè)基底節(jié)未見(jiàn)明顯萎縮,在4周時(shí)萎縮出現(xiàn),到8周時(shí)則更顯著。FJC染色提示2周時(shí),血腫側(cè)仍有變性神經(jīng)元存在。在海馬FeC12注射模型中也能在2周時(shí)檢測(cè)到變性神經(jīng)元。鐵離子螯合治療可以有效減輕腦出血后的遲發(fā)性腦萎縮。
4、小膠質(zhì)細(xì)胞激活和NF-kB的活化現(xiàn)象在腦出血模型和海馬FeC12模型中都存在并至少持續(xù)至建模后2周。米諾環(huán)素可以減輕腦出血后的遲發(fā)性腦萎縮。Fe2+能直接激活培養(yǎng)小膠質(zhì)細(xì)胞。Fe2+直接作用于培養(yǎng)神經(jīng)元,不能引起其LDH水平的增高,而Fe2+處理后的小膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)一步孵育產(chǎn)生的上清對(duì)神經(jīng)元具有損傷作用,應(yīng)用米諾環(huán)素則能有效逆轉(zhuǎn)這種損傷,米諾環(huán)素還能抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活和NF-kB的活化。
結(jié)論:
1)大鼠腦出血模
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