MicroRNA-145在耐藥的上皮性卵巢癌中表達水平的相關(guān)研究.pdf

1、目的:卵巢癌（Ovary cancer，OC）是常見的女性生殖道惡性腫瘤之一，發(fā)病率占所有女性腫瘤的第六位。上皮性卵巢癌(epithilial ovary cancer，EOC)來源于卵巢表層上皮，是最常見的卵巢癌類型，每年約有12萬患者死于該腫瘤，居所有婦科腫瘤病死率第一位。上皮性卵巢癌的高死亡率主要是因為其缺乏早期的特異性癥狀和體征，超過70％的初診卵巢癌患者分期已為Ⅲ期或Ⅳ期，失去了最佳治療時機。如果卵巢癌在腫瘤仍局限在卵巢內(nèi)的早

2、期被發(fā)現(xiàn)，并采取積極治療，患者的5年生存率將大于90％。卵巢癌目前首選的治療方案為減瘤術(shù)聯(lián)合鉑類為主的化療。盡管診斷和化療技術(shù)在不斷發(fā)展，但至今晚期患者的5年生存率僅為30％，且多數(shù)患者會復(fù)發(fā)并產(chǎn)生耐藥。那么，何為卵巢癌復(fù)發(fā)和耐藥的根源，何種細胞因子能抑制或促進腫瘤的發(fā)生和發(fā)展呢？這是學(xué)者目前的研究熱點，但迄今為止仍未有突破性的進展。
　　MicroRNAs（miRNAs）是一類長為18～24個核苷酸的內(nèi)源性非編碼的單鏈RNA分子

3、，廣泛存在生物體內(nèi)，在細胞的增殖、分化、凋亡及個體發(fā)育中發(fā)揮重要的作用。miRNA不編碼任何蛋白，通過降解或抑制兩種方式，負(fù)性調(diào)控靶基因的表達，進而調(diào)控人類約30％的基因表達。研究已證實miRNAs與腫瘤發(fā)生發(fā)展顯著相關(guān)，主要為腫瘤的增殖、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移及其耐藥等。miRNAs突變、缺失和表達水平的異常是所有腫瘤共有的特征。在眾多miRNAs中，有些miRNAs具有“癌基因”的作用，有些miRNAs卻具有“抑癌基因”的作用，哪些發(fā)揮“

4、抑癌基因”作用的miRNAs能作用于靶基因，抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展，進而逆轉(zhuǎn)腫瘤的復(fù)發(fā)和耐藥？MicroRNA145(miR-145)是microRNA家族中的一個亞型，研究證實miR-145為腫瘤抑制因子，可以抑制腫瘤干細胞的多能性進而影響腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移侵襲，并認(rèn)為其低表達會減弱對其靶基因的調(diào)控作用進而促進腫瘤的發(fā)生，故它的表達缺失與腫瘤細胞的惡性行為有關(guān)。已有發(fā)現(xiàn)其與腫瘤的耐藥性密切相關(guān)，如miR-145與肺癌的耐藥存在相關(guān)性，但

5、是miR-145與卵巢癌的耐藥性的相關(guān)性卻未見報道。
　　本研究旨在通過檢測上皮性卵巢癌細胞株、耐藥細胞株及其移植瘤中miR-145的表達，探討miR-145與卵巢癌耐藥是否存在相關(guān)性，為后期進一步研究轉(zhuǎn)染miR-145后能否抑制卵巢癌的耐藥提供實驗基礎(chǔ)，進而期待miR-145能夠成為一種腫瘤抑制劑，從而成為在惡性腫瘤的治療中的一種新的抗腫瘤途徑。
　　方法:
　　1.細胞培養(yǎng):人漿液性囊腺卵巢癌細胞系SKOV3和SK

6、OV3/DDP培養(yǎng)于含有10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，靜置于37℃，5％CO2，飽和濕度培養(yǎng)箱中。
　　2.構(gòu)建裸鼠移植瘤模型:常規(guī)體外培養(yǎng)非耐藥人卵巢漿液性囊腺癌細胞株SKOV3，耐藥細胞株SKOV3/DDP,待細胞覆蓋培養(yǎng)瓶底80％-90％時收集細胞，對細胞進行計數(shù)，制成5×107個/ml單細胞懸液，分別以每只裸鼠0.2ml（即1×107個細胞）于無菌條件下接種于裸鼠背側(cè)近后肢處的皮下。測量移植瘤的大小，在最長徑

7、達0.5-0.8cm（10天左右）時將腫瘤取出，立即放入液氮罐中，備用。
　　3.RT-PCR檢測:取未經(jīng)試劑固定、保存于-80℃冰箱的移植瘤組織，用RT-PCR技術(shù)檢測上皮性卵巢癌細胞株、耐藥細胞株及其移植瘤中miR-145的表達水平，經(jīng)公式2-ΔΔCtmiR-145計算得到各個標(biāo)本中miR-145相對表達量。
　　4.統(tǒng)計學(xué)方法:所得數(shù)據(jù)使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，采用Student's t檢驗分析miR-145在普通

8、癌細胞與耐藥癌細胞間、移植瘤中普通癌細胞與耐藥癌細胞間及體外細胞與移植瘤中的表達差異，結(jié)果以(x)±s表示，其中P＜0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.miR-145在SKOV3/DDP細胞中表達低于SKOV3細胞(0.45±0.07 vs1.09±0.16P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2.miR-145在SKOV3/DDP裸鼠移植瘤中表達低于SKOV3裸鼠移植瘤（0.41±0.06 vs1.1

9、3±0.34 P＜0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.miR-145在體外培養(yǎng)的SKOV3細胞中表達低于SKOV3裸鼠移植瘤（1.09±0.16 vs2.89±0.89 P＜0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1.無論在體內(nèi)還是體外培養(yǎng)的卵巢癌細胞中，miR-145在耐藥的卵巢癌細胞中表達量均較非耐藥卵巢癌細胞低，說明miR-145與腫瘤的耐藥存在相關(guān)性，其表達水平的降低可能減弱對其靶基因的作用，從而導(dǎo)