曲美他嗪與雷米普利對慢性心力衰竭大鼠心肌細胞凋亡的影響.pdf

1、心力衰竭作為各種心臟病變的終末階段，其發(fā)生發(fā)展中存在著心肌缺血及凋亡事件,這些都與心肌代謝密切相關(guān)。曲美他嗪（trimetazidine，TMZ)是一種改善心肌代謝的心血管藥物，具有抗心絞痛作用。通過抑制脂肪酸β氧化，優(yōu)化心肌能量代謝，減輕心肌缺血，改善心肌收縮力。曲美他嗪被成功地用于缺血性心臟病的治療，但目前在慢性心力衰竭的治療中仍有很大的潛力尚未被發(fā)掘。本實驗通過探討在相同條件下各組大鼠心肌細胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspas

2、e-3）、Bax和Bcl-2的水平,研究分析曲美他嗪與雷米普利單獨應(yīng)用及聯(lián)合應(yīng)用可能對慢性心衰大鼠心肌細胞凋亡所產(chǎn)生的影響。
　　目的：
　　對研究對象實施腎上腹主動脈縮窄術(shù)建造心衰大鼠模型。確保手術(shù)成功后繼續(xù)藥物干預(yù)，通過蘇木素伊紅（HE）染色觀察大鼠心肌組織的病理轉(zhuǎn)歸，電子透射電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)的變化，TUNEL法檢測心肌細胞凋亡情況，免疫組織化學(xué)染色法和RT-PCR法觀察caspase-3蛋白、Bax蛋白和Bcl-2蛋

3、白在慢性心力衰竭大鼠心肌中的表達，探究曲美他嗪和雷米普利分別及聯(lián)合干預(yù)慢性心力衰竭大鼠對其心肌細胞凋亡所產(chǎn)生的影響。
　　方法：
　　1、選購Wistar大鼠，需清潔級雄性，在60只中隨機抽取10只大鼠作為對照組，剩余實驗對象實施腹主動脈縮窄術(shù)造模。模型成功標(biāo)準(zhǔn)定為左室舒張末壓（LVEDP）大于等于15mmHg。此外，對于對照組大鼠分離出腹主動脈不結(jié)扎。把造模成功的實驗大鼠隨機分配到心衰模型組、雷米普利組、曲美他嗪組和聯(lián)合用

4、藥組。
　　2、分別達到各實驗大鼠觀察結(jié)束點時，利用多導(dǎo)電生理記錄儀測量各實驗對象的左室舒張末壓、以及左室內(nèi)壓上升與下降最大速率（±dp/dtmax），詳細準(zhǔn)確地記錄結(jié)果。開胸取各大鼠左心室，稱重，并算出左心室質(zhì)量指數(shù)（LVMI）。
　　3、運用HE染色對大鼠心肌組織病理學(xué)改變進行觀察。
　　4、使用透射電鏡觀察各組大鼠左心室心肌組織的超微結(jié)構(gòu)改變。
　　5、用TUNEL法衡量心肌細胞凋亡情況，推算凋亡指數(shù)（AI

5、）。
　　6、 SP免疫組織化學(xué)法檢測大鼠左心室心肌組織caspese-3蛋白、Bax蛋白和Bcl-2蛋白的相對表達情況。
　　7、采用RT-PCR法測定各組大鼠caspase-3 mRNA、Bax mRNA和Bcl-2 mRNA的表達。
　　結(jié)果：
　　1、各實驗對象血流動力學(xué)參數(shù)：對照組、心衰模型組、雷米普利組、曲美他嗪組和聯(lián)合用藥組大鼠±dp/dtmax分別為（5407.16±147.39）mmHg/s和（

6、4407.69±195.18）mmHg/s、（4104.64±193.93）mmHg/s和（2813.56±141.37）mmHg/s、（4522.32±124.09）mmHg/s和（3704.18±135.10） mmHg/s、（4566.87±148.37）mmHg/s和（3659.25±118.98）mmHg/s、（4896.10±164.03）mmHg/s和（4147.61±227.07）mmHg/s。對照組、心衰模型組、雷米普

7、利組、曲美他嗪組和聯(lián)合用藥組大鼠的LVEDP分別為：（5.63±0.98）mmHg、（19.62±1.91）mmHg、（12.24±1.43）mmHg、（12.03±1.23）mmHg、（7.48±1.41）mmHg。心衰模型組及三組用藥組大鼠的±dp/dtmax較對照組明顯下降(P<0.01)，LVEDP較對照組的有所上升(P<0.01)。和心衰模型組相比，用藥組實驗對象的±dp/dtmax均明顯升高(P<0.01)，LVEDP有所下

8、降(P<0.01)，聯(lián)合用藥組變化最大(P<0.01)，曲美他嗪組與雷米普利組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　2、各組大鼠的LVMI：對照組、心衰模型組、雷米普利組、曲美他嗪組及聯(lián)合用藥組大鼠的LVMI分別為(2.15±0.12)‰、(4.44±0.23)‰、(3.03±0.23)‰、(2.91±0.23)‰、(2.51±0.34)‰。與對照組比較，心衰模型組 LVMI均有顯著上升(P<0.01)，與心衰模型組比較，喂藥組大鼠

9、的LVMI均有所下降(P<0.01)，其中兩藥聯(lián)合組下降程度最大(P<0.01)。
　　3、各組大鼠心肌組織的病理學(xué)改變：蘇木素-伊紅（HE）染色：對照組大鼠心肌細胞排列緊密、規(guī)則，形態(tài)正常，結(jié)構(gòu)清晰；心衰模型組大鼠心肌細胞排列疏松、雜亂，心肌細胞部分肥大、水腫，結(jié)構(gòu)模糊；用藥組較心衰模型組均有明顯改變，且聯(lián)合用藥組改善最明顯。
　　4、各組實驗大鼠左心室心肌組織的超微結(jié)構(gòu)變化：對照組：細胞布列整齊，存在正常肌小節(jié)，肌束排列

10、整齊，線粒體大小均勻，線粒體嵴完整清晰；心衰模型組部分肌纖維斷裂，排列疏松、結(jié)構(gòu)錯亂，線粒體腫脹，空泡樣變，且大小不均，部分線粒體嵴溶解斷裂；用藥組實驗對象左心室心肌組織的超微結(jié)構(gòu)變化有不同程度好轉(zhuǎn)，且聯(lián)合用藥組實驗對象心肌超微結(jié)構(gòu)改善最明顯，曲美他嗪組和雷米普利組間差異不大。
　　5、各組大鼠的心肌細胞凋亡指數(shù)（AI）：采用TUNEL法檢測心肌細胞凋亡情況：對照組、心衰模型組、曲美他嗪組、雷米普利組和聯(lián)合用藥組大鼠的AI分別為(

11、1.68±0.76)％、(40.03±1.53)%、(23.77±1.57)%、(23.84±1.74)%、(15.64±1.67)%。與對照組比較，其他大鼠的AI均明顯上升(P<0.01)，與心衰模型組比較，三組用藥組的AI均明顯下降(P<0.01)，其中聯(lián)合用藥組下降最顯著(P<0.01)。
　　6、用免疫組化法估測各組實驗大鼠心肌組織中caspese-3蛋白、Bax蛋白和Bcl-2蛋白的表達水平：各組大鼠心肌組織中caspe

12、se-3蛋白、Bax蛋白表達趨勢相似，對照組大鼠細胞內(nèi)無明顯棕黃色顆粒；心衰模型組大鼠細胞內(nèi)則有明顯棕黃色顆粒沉積，用藥組陽性反應(yīng)弱，聯(lián)合用藥組最弱。Bcl-2蛋白在各組大鼠心肌組織中的表達為：對照組陽性表達最強，心衰模型組無明顯陽性反應(yīng)，用藥組陽性反應(yīng)較心衰模型組增強，聯(lián)合用藥組陽性反應(yīng)較強，僅次于對照組。
　　7、用RT-PCR法檢測各組實驗對象中caspase-3、Bax和Bcl-2的mRNA相對水平：同對照組比較，心衰模型

13、組實驗大鼠caspase-3、BaxmRNA的相對表達水平有很大程度的升高（P<0.01），Bcl-2mRNA水平則有很大程度的降低（P<0.01）。藥物干預(yù)組caspase-3、Bax的mRNA水平較心衰組明顯降低（P<0.01），Bcl-2mRNA的表達水平明顯升高（P<0.01），雷米普利組與曲美他嗪組二者之間的三個指標(biāo) mRNA相對水平無統(tǒng)計學(xué)差異(P﹥0.05)，在三個藥物干預(yù)組當(dāng)中聯(lián)合用藥組 caspase-3、Bax的mR