γ-干擾素抑制腎癌細胞株786-0增殖及可能機制.pdf

1、第一部分、人腎癌組織中MAD1及hepaCAM的表達及相關性分析
　　目的:探究人腎癌組織中肝細胞粘附分子hepaCAM(Hepatocytecell adhesion molecule)和MAD1(Mitotic arrest deficiency-1)蛋白表達情況及兩者之間相關性和各組臨床病理參數(shù)的分析。
　　方法:采用石蠟包埋37例腎癌組織及37例相應癌旁組織，免疫組織化學法(Immunohistochemistry)

2、檢測該組織中hepaCAM蛋白及MAD1蛋白的表達及其在細胞中表達的定位。
　　結果:免疫組化分析結果顯示37腎癌組織均不表達hepaCAM及MAD1，37例腎癌癌旁組織有不同程度hepaCAM和MAD1表達。hepaCAM在37例癌旁組織中細胞膜及細胞漿都有表達，主要表達于細胞膜，未見細胞核有表達。MAD1在細胞膜和細胞胞漿表達的癌旁組織有33例且主要在細胞胞漿表達，細胞膜、細胞漿和細胞核均表達的腎癌癌旁組織4例。圖片經Imag

3、e pro-plus6.0分析，結果顯示:在腎癌組織中hepaCAM及MAD1均表達缺失，正常表達于癌旁組織(hepaCAM，P＜0.01;MAD1，P＜0.01)。hepaCAM與MAD1在腎癌中的表達缺失與各臨床參數(shù)間均無相關性(P＞0.05)。Person相關性分析結果表明在腎癌中hepaCAM蛋白表達缺失與MAD1蛋白缺失表達呈正相關(r=0.881，P＜0.01)。
　　結論:腎癌組織中hepaCAM蛋白表達的缺失及MA

4、D1蛋白表達的缺失呈正相關，為探討二者在腎癌發(fā)生發(fā)展及治療中的提供了臨床依據(jù)。
　　第二部分、γ-干擾素抑制腎癌細胞株786-0增殖的機制研究
　　目的:研究γ-干擾素對腎癌細胞株786-0增殖的影響及可能的分子機制的研究。
　　方法:應用五組梯度終濃度(1000U/mL，2000U/mL，3000U/mL，4000U/mL，5000U/mL) IFN-γ處理人腎癌786-0細胞，于三個時間點(24 h，48 h，72

5、 h)用CCK-8（cell Counting Kit-8）法檢測腎癌786-0細胞增殖抑制率。以終濃度900U/mLIFN-γ作用腎癌786-0細胞48h作為實驗組，未用IFN-γ處理的786-0細胞作為對照組，流式細胞儀檢測(flow cytometry, FCM)腎癌786-0細胞周期變化。RT-PCR檢測肝細胞粘附分子hepaCAM基因表達;Western blotting檢測hepaCAM和MAD1蛋白的表達水平。將攜帶hep

6、aCAM基因的重組質粒用腺病毒瞬時轉染腎癌786-0細胞，Western blotting檢測hepaCAM及MAD1蛋白的表達水平。
　　結果:γ-干擾素抑制腎癌786-0細胞增殖呈時間劑量依賴性(P＜0.05);實驗組與對照組相比，經流式細胞儀檢測結果顯示細胞G0/G1期比例增高(n=3，P＜0.01)，RT-PCR結果提示hepaCAM基因表達水平升高(n=3，P＜0.05)，未見其在蛋白水平變化(data not show