MIF通過(guò)ERK信號(hào)通路對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：從細(xì)胞層面上研究MIF通過(guò)ERK信號(hào)途徑促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制，為進(jìn)一步研發(fā)以MIF為靶點(diǎn)治療HCC的藥物研發(fā)建立理論基礎(chǔ)。
　　方法：首先，將MIF(50 ng/ml，100 ng/ml，200 ng/ml)加入肝癌細(xì)胞HepG2作為實(shí)驗(yàn)組,MIF(50 ng/ml，100 ng/ml，200 ng/ml)加入肝硬化細(xì)胞QSG-7701和正常肝細(xì)胞L-02中作為對(duì)照組,將MIF拮抗劑ISO-1(50μM)加入肝癌細(xì)胞H

2、epG2中作為陰性對(duì)照組，各組細(xì)胞設(shè)一組空白對(duì)照組，只加入培養(yǎng)基。通過(guò)MTT法檢測(cè)HepG2細(xì)胞存活率來(lái)篩選MIF最佳濃度。其次，培養(yǎng)各組細(xì)胞24 h后收集細(xì)胞，用Real time-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞ERK基因表達(dá)，用 Western-blot法檢測(cè)各組細(xì)胞ERK蛋白表達(dá)及其磷酸化水平（p-ERK）。
　　結(jié)果：1.MIF具有明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖作用，在HepG2作用最為顯著；2.MTT法可得出在同一時(shí)間，隨著濃度升高M(jìn)IF促增殖作

3、用逐漸增強(qiáng)，濃度為200ng/ml時(shí)細(xì)胞增殖最顯著，在HepG2作用更為顯著；3.Real time-PCR檢測(cè)結(jié)果可見(jiàn)與對(duì)照組相比，ERK基因表達(dá)量是上調(diào)的，在MIF濃度最大時(shí)（200 ng/ml）ERK基因的表達(dá)與低濃度組及對(duì)照組相比增多最為顯著（P<0.05），HepG2與QSG-7701、L-02比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），QSG-7701與L-02比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。Western-blot結(jié)果提

4、示不同濃度MIF組ERK蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異，而p-ERK的表達(dá)是上調(diào)的，其中MIF濃度為200 ng/ml時(shí)p-ERK蛋白表達(dá)較低濃度組及對(duì)照組明顯增多（P<0.05），HepG2與QSG-7701、L-02比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），QSG-7701與L-02比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；4.ISO-1通過(guò)抑制MIF表達(dá)，下調(diào)ERK信號(hào)通路蛋白表達(dá)，抑制HepG2細(xì)胞增殖，Real time-PCR檢測(cè)顯示與MIF