辛伐他汀抑制肺癌細(xì)胞增殖的氧化應(yīng)激調(diào)控機(jī)制.pdf

1、他汀類藥物(statins)通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合生物膽固醇合成限速酶一HMG-CoA還原酶，從而阻斷甲羥戊酸形成，最終達(dá)到有效降低膽固醇合成的效果。與其他降脂藥物相比，他汀類藥物降低血清膽固醇和低密度脂蛋白效果顯著、副作用小、安全性高，是目前臨床上治療高膽固醇血癥的一線藥物。臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)他汀類藥物除降血脂作用外，同時(shí)還具有逆轉(zhuǎn)內(nèi)皮功能異常、調(diào)節(jié)免疫功能、減少室性心律失常及血栓形成等多效性效果。近年來(lái)研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，他汀類藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞具有抑

2、制增殖、誘導(dǎo)分化或凋亡、抑制血管發(fā)生、降低侵襲轉(zhuǎn)移能力等作用。大量體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均證實(shí)，他汀類藥物對(duì)前列腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、膀胱癌及乳腺癌等多種癌細(xì)胞均有顯著抑制作用，且對(duì)正常細(xì)胞影響不大，是一種較有潛力的抗腫瘤藥物，其抗腫瘤作用及機(jī)制已成為近年來(lái)研究的熱點(diǎn)之一。
　　 目前研究發(fā)現(xiàn)，在癌變與抑癌過(guò)程中活性氧與自由基發(fā)揮著重要作用。事實(shí)上，癌細(xì)胞和癌組織主要在氧濃度低的機(jī)體內(nèi)環(huán)境下生存，而且比正常細(xì)胞的抗氧化防御系統(tǒng)脆弱?？拱﹦?/p>

3、多可產(chǎn)生活性氧和自由基并大量聚集于癌組織，從而發(fā)揮抗癌作用。當(dāng)癌細(xì)胞處于氧化應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，細(xì)胞內(nèi)ROS量升高并激活相應(yīng)的抗ROS防御體系，例如超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、過(guò)氧化氫酶(CAT)及抗氧化物質(zhì)(如維生素C、維生素E)等。超氧化物歧化酶(SOD)根據(jù)其所含金屬輔酶因子的不同可分為3類：銅鋅超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD，SOD1)、錳型超氧化物歧化酶(MnSOD，SOD2)和含鐵超氧化物歧化酶(

4、FeSOD，SOD3)。其中錳型超氧化物歧化酶是線粒體內(nèi)主要的酶性自由基清除劑，對(duì)維持胞內(nèi)氧化還原平衡至關(guān)重要，且與腫瘤發(fā)生相關(guān)。
　　 為了明確他汀類藥物在肺癌治療中的應(yīng)用可行性及其潛在的抑癌機(jī)制，本文以肺癌細(xì)胞A549為研究材料，探討辛伐他汀通過(guò)氧化應(yīng)激及抑癌基因sod2的上調(diào)抑制A549的增殖。本文首先進(jìn)行了辛伐他汀對(duì)A549生長(zhǎng)抑制的量效測(cè)定和時(shí)效測(cè)定，然后選擇辛伐他汀50μmol/L，60μmol/L兩個(gè)濃度分析藥物作

5、用前后肺癌細(xì)胞A549中ROS、MDA、總SOD活性、SOD2活性水平的變化。為了進(jìn)一步論證辛伐他汀對(duì)A549抑制作用與氧化應(yīng)激之間的相關(guān)性，本文還分析了維生素C(Vc)對(duì)辛伐他汀細(xì)胞毒性的緩解作用。最后選用半定量RT-PCR的方法分析了藥物處理后A549細(xì)胞中sod2的表達(dá)變化。
　　 本文首先采用MTT法分析了辛伐他汀對(duì)A549增值的抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示辛伐他汀作用肺癌細(xì)胞48h后，可產(chǎn)生顯著的抗細(xì)胞增殖作用，且呈明顯的劑

6、量和時(shí)間依賴性，并初步獲得辛伐他汀對(duì)A549的IC50約為50μmol/L。然后選用50μmol/L，60μmol/L的辛伐他汀作用A549，48h后進(jìn)行檢測(cè)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)MDA水平、SOD和SOD2活性均存在顯著上調(diào)，而VC的加入則可有效緩解辛伐他汀所引起的這種改變。說(shuō)明辛伐他汀可破壞胞內(nèi)氧化還原平衡，促使細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激增強(qiáng)，從而實(shí)現(xiàn)抑制細(xì)胞增殖的效果。錳型超氧化物歧化酶由基因sod2所編碼，在最新的研究中報(bào)道sod2是一種潛在

7、的新型抑癌基因.。辛伐他汀可以上調(diào)SOD2的活性，因此我們進(jìn)一步分析了辛伐他汀對(duì)sod2 mRNA水平的調(diào)節(jié)作用。RT-PCR半定量分析顯示，50μmol/L和60μmol/L辛伐他汀可以使sod2基因的mRNA水平分別上調(diào)18.2％和35％說(shuō)明辛伐他汀對(duì)A549的增值抑制可能是通過(guò)上調(diào)抑癌基因sod2來(lái)發(fā)揮作用的。
　　 上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明辛伐他汀可有效抑制肺癌細(xì)胞A549的增殖，其機(jī)制可能涉及到氧化應(yīng)激以及對(duì)抑癌基因sod2的