骨肉瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因篩選研究和BLCAP基因克隆、表達(dá)及初步功能研究.pdf

1、結(jié)論: 1.運(yùn)用基因芯片技術(shù),分析比較兩種具有不同轉(zhuǎn)移能力的骨肉瘤細(xì)胞基因表達(dá)譜,初步實(shí)驗(yàn)獲得11個(gè)差異表達(dá)基因,分別參與細(xì)胞生長和分化、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等過程,這些基因在骨肉瘤轉(zhuǎn)移過程中的作用有待深入研究.2.在基因芯片篩選的基礎(chǔ)上,用反義寡核苷酸技術(shù)作進(jìn)一步篩選,發(fā)現(xiàn)了一個(gè)可能具有抑癌基因功能的新基因BLCAP基因.該基因在骨肉瘤中的表達(dá)情況及其與骨肉瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系尚未見研究報(bào)道.3.運(yùn)用RT-PCR等分子生物學(xué)常規(guī)手段,獲得B

2、LCAP基因ORF,長度為263bp.構(gòu)建了原核細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒pGEX-4T1-BLCAP和真核細(xì)胞表達(dá)表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-BLCAP.4.SDS-PAGE結(jié)果表明,pGEX-4T1-BLCAP轉(zhuǎn)化大腸桿菌,誘導(dǎo)表達(dá)GST-BLCAP分子量約為36KD的融合蛋白,為制備抗BLCAP抗體,深入研究BLCAP基因的功能奠定基礎(chǔ).5.用pcDNA3.1-BLCAP進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染研究,結(jié)果顯示該基因具有抑制骨肉瘤細(xì)胞生長速度和增殖活性的作用,