戊四氮點燃大鼠顳葉和海馬區(qū)PX1mRNA和Cx36mRNA的表達及甘珀酸的干預作用.pdf

1、1背景和目的
　　 癲癇是一種有多種病因引起的慢性腦部疾患,以神經(jīng)元過度同步放電導致反復、發(fā)作性和短暫性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失常為特征。雖然癲癇的發(fā)病機制非常復雜,但其本質(zhì)都是大腦皮質(zhì)神經(jīng)元的過度同步化放電。近年來的研究表明,這種同步化放電與離子通道、神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)膠質(zhì)細胞、突觸傳遞及縫隙連接有密切的關(guān)系,其中縫隙連接(gap junction,GJ)在癲癇發(fā)病機制中的重要作用成為研究的熱點之一?？p隙連接是細胞間一些能夠直接進行物

2、質(zhì)信息交換的通道,是電突觸的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ),縫隙連接蛋白是其結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。目前國內(nèi)外發(fā)現(xiàn)至少20余種connexion基因和三種pannexin基因序列編碼大鼠的連接蛋白。Cx36(connexion-36)發(fā)現(xiàn)多在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元高表達,而對PX1(pannexin-1)的研究在國內(nèi)少見。甘珀酸(carbenoxolone,CBX)最初發(fā)現(xiàn)用來治療消化性潰瘍,能較好的透過血腦屏障,有阻斷縫隙連接的作用,在體外實驗中發(fā)現(xiàn)其能抑制癲癇樣放電。本

3、實驗旨在通過戊四氮(pentylenetetrazole,PTZ)點燃癲癇模型,觀察PX1mRNA和Cx36mRNA在海馬和顳葉的表達及進行兩者的量化比較,并探討甘珀酸的干預作用。
　　 2材料與方法
　　 成年健康雄性SD(Sprague-Dawleyl)大鼠30只,隨機分為3組:點燃組(K組),點燃后干預組(CBX組),生理鹽水對照組(NS組),每組10只。K組、CBX組大鼠每日腹腔注射10g/L的PTZ35mg/(

4、kg.d)至點燃,再分別腹腔注射生理鹽水、CBX10mg/(kg.d)干預3d,NS組每日腹腔注射生理鹽水3.5mL/(kg.d)。3組均于每天固定時間注射一次。根據(jù)Racine癇性發(fā)作分級法,觀察并記錄每次PTZ或生理鹽水,CBX注射后大鼠行為學變化。當實驗組大鼠癇性發(fā)作達到點燃標準并干預3天后,在基本相同時間點斷頭取腦,采用RT-PCR方法觀察顳葉和海馬區(qū)PX1mRNA和Cx36mRNA的表達。數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差((X)±S)表示,

5、采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。組間比較采用單因素方差分析,兩組間比較應用q檢驗,α=0.05為檢驗水準。
　　 3結(jié)果
　　 (1)K組與CBX組大鼠1-2周開始Ⅰ-Ⅱ級發(fā)作,發(fā)作多在腹腔注射后10-15分鐘出現(xiàn),30分鐘后少有發(fā)作。4周時均有Ⅳ-Ⅴ級發(fā)作,達到完全點燃。NS組大鼠無一例抽搐表現(xiàn)。點燃后K組大鼠有較多的Ⅲ級及Ⅲ級以下發(fā)作,Ⅳ級及Ⅴ可見。CBX組大鼠多有Ⅰ-Ⅱ級發(fā)作,Ⅲ級以上發(fā)作少見。

6、　　 (2)PX1mRNA和Cx36mRNA在海馬和顳葉的表達為K組、CBX組均大于NS組(P<0.01),K組的表達大于CBX組(P<0.05),而PX1mRNA在各組的表達海馬區(qū)高于顳葉(P<0.05),Cx36mRNA在各組的表達顳葉區(qū)高于海馬區(qū)(P<0.05)。
　　 4結(jié)論
　　 (1)PTZ能誘發(fā)大鼠的癲癇發(fā)作,較好地模擬了人類慢性癲癇發(fā)生、擴布和形成的全過程。
　　 (2)CBX干預,能使點燃癲癇