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文檔簡介
1、研究目的:
通過對不同濃度的葡萄糖(glucose, GLU)和糖波動環(huán)境下,小鼠腹腔巨噬細胞(mouse peritoneal macrophages, MPM)白介素-18(interleukin-18, IL-18) mRNA的表達情況及IL-18分泌量的變化和不同培養(yǎng)時間對高血糖環(huán)境下MPM的IL-18 mRNA表達及IL-18分泌量變化的影響,以及不同濃度的JNK通路抑制劑對高血糖狀態(tài)下MPM的IL-18 mRNA表
2、達及IL-18分泌量影響進行研究,以探討糖尿病時MPM參與糖尿病大血管病變的機制。
研究方法:
1分離純化的MPM隨機分為6組:1組、2組、3組、4組、5組(GLU濃度分別為4.0 mmol/L、8.0 mmol/L、16.0 mmol/L、24.0 mmol/L和32.0 mmol/L)和GLU濃度波動組(GLU濃度8.0 mmol/L1.5小時-24.0 mmol/L1.5小時-16.0 mmol/L1.5小時-
3、32.0 mmol/L1.5小時)。利用半定量逆轉錄聚合酶鏈反應技術(reverse-transcription-polymer chain reaction, RT-PCR)和酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)技術分別檢測各組MPM的IL-18 mRNA的表達情況和IL-18的分泌量。
2在3 h、6 h、12 h和18 h時間點下,把分離純化的MPM隨機分為4組
4、。使用半定量RT-PCR方法和ELISA法在32.0 mmol/L GLU濃度下分別檢測各組MPM的IL-18 mRNA的表達及IL-18的分泌量。
3分離純化MPM,根據(jù) c-Jun氨基末端蛋白激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)通路抑制劑SP600125的濃度隨機分為4組:陰性對照組,5 umol/L組,10 umol/L組,15 umol/L組。在32.0 mmol/L GLU濃度下,使用半定
5、量RT-PCR方法和ELISA法分別檢測各組MPM的IL-18 mRNA的表達和IL-18的分泌量。
研究結果:
1高糖促進MPM的IL-18表達。MPM的在GLU含量為4 mmol/L的RPMI1640培養(yǎng)基中表達很少,IL-18/?-actin的比值為0.13±0.04;在8 mmol/L GLU組,16 mmol/L GLU組、24 mmol/L GLU組和32 mmol/L GLU組IL-18表達逐漸升高,各
6、組IL-18分泌具有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。在含32 mmol/L GLU的1640培養(yǎng)液中孵育6小時,其IL-18/?-actin的比值達1.04±0.03,可見高糖促進MPM的IL-18的表達;在GLU波動組,IL-18/?-actin的比值為0.78±0.05,較32 mmol/L GLU組低,差異有統(tǒng)計學意義((P<0.001),較24 mmol/L GLU組高,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。各組IL-18分泌量變化的
7、趨勢與各組IL-18 mRNA表達的變化趨勢一致,組間比較均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
2高糖培養(yǎng)下的MPM的IL-18表達變化與培養(yǎng)時間的關系。3h組、6h組和12h組相對灰度值IL-18/β-actin分別為0.78±0.07、1.04±0.02和1.22±0.05,各組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。在培養(yǎng)18 h時,相對灰度值IL-18/β-until為0.59±0.07,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。各組
8、IL-18分泌量變化的趨勢與各組IL-18 mRNA表達的變化趨勢一致,組間比較均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
3 SP600125對高糖培養(yǎng)的MPM的IL-18 mRNA基因表達及分泌量的影響。在0 umol/L組,5 umol/L組,10 umol/L組,15 umol/L組相對灰度值IL-18/β-actin分別為1.22±0.03、1.03±0.05、0.74±0.07和0.57±0.08。組間比較差異均有統(tǒng)計學意義
9、(P<0.01)。各組IL-18分泌量變化的趨勢與各組IL-18 mRNA表達的變化趨勢一致,組間比較均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
研究結論:
1 GLU促進MPM的IL-18表達和分泌。波動的GLU濃度對IL-18表達和分泌有重要影響。
2在12h內,隨時間延長,高糖環(huán)境下MPM的IL-18的表達和分泌增加,在12小時后隨時間下降。
3 JNK通路可能是高糖培養(yǎng)的MPM的IL-18表達和分泌
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