葡萄糖、胰島素對單核巨噬細胞系THP-1細胞功能對Bmi-1基因表達的影響.pdf

1、目的:探討不同葡萄糖和胰島素濃度對單核巨噬細胞ROS產量、吞噬功能以及細胞增殖基因多梳蛋白Bmi-1基因表達情況。
　　方法:1.培養(yǎng)細胞
　　將細胞置于含有10％胎牛血清、RPMI-1640（含5.0mmol/L葡萄糖）的培養(yǎng)液里，放置在5％二氧化碳飽和濕度、37℃的孵育箱中進行細胞培養(yǎng)。每2～3天換液或傳代一次，于對數生長期收獲細胞，細胞達到同步化后加入不同實驗處理因素。THP-1細胞以100ng/L的PMA（12-豆蔻

2、酰及-13-乙酸酯）誘導分化為巨噬細胞。
　　2.實驗分組
　　本實驗分別用不同濃度的葡萄糖對THP-1細胞進行培養(yǎng)(5.0、10.0、20.0mmol/L)，分別加入不同濃度胰島素(20、50、200IU/L)培養(yǎng)48小時后收獲細胞，熒光分光光度計檢測ROS產量、酶標儀檢測細胞吞噬功能，以及Real-TimePCR檢測Bmi-1基因mRNA，Western Blot檢測蛋白表達水平。
　　結果:1.葡萄糖、胰島素對T

3、HP-1細胞功能的影響
　　(1)糖濃度從5mmol/L到20mmol/L遞增中，THP-1氧化應激的能力逐步增高。吞噬功能在糖濃度5mmol/L、10mmol/L明顯高于20mmol/L。
　　(2)添加胰島素可使氧化應激水平能力增高，但胰島素濃度變化對ROS產量無明顯影響。胰島素濃度20IU/L、50IU/L和200IU/L下培養(yǎng)細胞ROS產量無明顯差異。添加胰島素可使吞噬功能下降，而胰島素濃度從20IU/L遞增至200

4、IU/L，吞噬功能顯著下降。
　　(3)當葡萄糖和胰島素共同存在時，隨著胰島素濃度增高，各個糖濃度下的ROS產量均增加，ROS水平最高值在糖濃度20mmol/L、胰島素濃度200IU/L時。在糖濃度10mmol/L情況下，各個胰島素濃度下吞噬能力均增強，在糖濃度10mmol/L、胰島素濃度20IU/L時，吞噬功能最強;在糖濃度20mmol/L情況下，吞噬能力總體水平高于5mmol/L時，但仍低于糖濃度10mmol/L的各個水平。<

5、br>　　2.葡萄糖、胰島素對THP-1細胞中Bmi-1表達的影響
　　(1)葡萄糖濃度在5mmol/L下，胰島素濃度從20IU/L增加至200IU/L時，Bmi-1表達下降，但胰島素濃度從50 IU/L增加至200 IU/L時無顯著統(tǒng)計學差異。
　　(2)葡萄糖濃度在10mmol/L及20mmol/L下，胰島素濃度從20IU/L增加至200IU/L時，Bmi-1表達下降。
　　(3)胰島素濃度在20IU/L及50IU

6、/L下，隨著糖濃度增加，Bmi-1表達下降。
　　(4)胰島素濃度在200IU/L下，糖濃度從5mmol/L遞增至20mmol/L時，Bmi-1表達下降，糖濃度從5mmol/L遞增至10mmol/L時無顯著差異。
　　(5)葡萄糖和胰島素都對Bmi-1表達起顯著作用，兩者是否有協同作用尚不得而知。
　　結論:血糖在≤10 mmol/L以及胰島素濃度≤20 IU/L下THP-1細胞的殺傷能力以及吞噬能力最為平衡。但當血糖