高通量蛋白芯片新方法的研究與應(yīng)用.pdf

1、隨著蛋白質(zhì)組學(xué)的快速發(fā)展，研究新的大規(guī)模、高通量分析技術(shù)已經(jīng)成為生命科學(xué)技術(shù)中的前沿領(lǐng)域。蛋白質(zhì)芯片技術(shù)因具有靈敏度高、分析通量大和易于微型化等優(yōu)點(diǎn)，近年來已經(jīng)引起了生物學(xué)家的廣泛重視。隨著蛋白質(zhì)芯片技術(shù)的不斷創(chuàng)新與完善，蛋白質(zhì)芯片已經(jīng)在蛋白質(zhì)表達(dá)的檢測、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的鑒定和蛋白質(zhì)功能研究等領(lǐng)域獲得了成功。 本文首先建立了大規(guī)?？贵w篩選的蛋白芯片分析新方法。這種新穎的組合式蛋白芯片技術(shù)集合了蛋白質(zhì)芯片和微孔板分析模式的

2、優(yōu)點(diǎn)，形成了與96孔板相匹配的分析模式。其每個孔中可以固定100個蛋白點(diǎn)，大大提高了分析通量。在方法學(xué)的研究中，首先制備了每個反應(yīng)池中包含35種抗原的抗原芯片，接著采用熒光法對組合式抗原芯片的分析性能進(jìn)行了評價，如片內(nèi)變異系數(shù)，片間變異系數(shù)、芯片上相同樣品重復(fù)點(diǎn)間的均一性和抗原芯片的檢測范圍及檢測限，并比較了蛋白芯片與ELISA方法在分析性能上的差異。最后，利用此抗原芯片采用夾心法評價了75株抗體的活性及特異性，為抗體制備過程中大規(guī)模雜

3、交瘤篩選工作打下了良好的基礎(chǔ)。 其次，本研究建立了基于銀增強(qiáng)的蛋白芯片檢測方法。利用抗體芯片聯(lián)合銀增強(qiáng)檢測技術(shù)對甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)這兩種肝癌相關(guān)的疾病標(biāo)志物進(jìn)行了同時檢測。通過優(yōu)化銀增強(qiáng)檢測技術(shù)中的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，分別確立AFP和CEA的量效關(guān)系，兩者的檢測限分別可以達(dá)到5.1ng/ml和4.0ng/ml。通過對質(zhì)控血清中的這兩個指標(biāo)的檢測，使本方法獲得了良好的驗(yàn)證。銀增強(qiáng)檢測技術(shù)具有結(jié)果直觀、便于目測等優(yōu)點(diǎn)，該方

4、法具有應(yīng)用于大規(guī)模人群健康體檢的分析潛力。 最后，本文還建立了一套基于瓊脂糖印章技術(shù)與銀增強(qiáng)法檢測技術(shù)的新的蛋白芯片實(shí)驗(yàn)方法。本研究通過對比連續(xù)印制蛋白微陣列點(diǎn)得到的信號，對瓊脂糖印章制備蛋白質(zhì)芯片的能力進(jìn)行了評價。然后分別采用直接法和夾心法考察了瓊脂糖印章結(jié)合銀增強(qiáng)法的定量分析能力。結(jié)果表明直接法檢測的最低檢測限為0.33fmol；夾心法檢測的最低檢測限為0.13fmol。由于這兩種技術(shù)均具有材料易得、便于操作等特點(diǎn)，有望成為