肺缺血再灌注損傷時(shí)HO-1-CO徑路的變化及葛根素對(duì)其的影響.pdf

1、目的：探討兔肺缺血再灌注損傷時(shí)血紅素加氧酶一1(hemeoxygenase-1，HO-1)／一氧化碳(carbonmonoxide，CO)徑路的變化及葛根素對(duì)其的影響。 方法：健康日本大耳白兔70只，隨機(jī)分為對(duì)照組(C組)、缺血再灌注1小時(shí)(IRlh)、3小時(shí)(IR3h)、5小時(shí)(IR5h)組和葛根素1小時(shí)(Purlh)、3小時(shí)(Pur3h)、5小時(shí)(Pur5h)組。麻醉后左側(cè)開(kāi)胸，游離肺門(mén)，穿過(guò)阻斷帶，復(fù)制在體原位單肺缺血再灌

2、注模型。C組左肺門(mén)過(guò)阻斷帶后不阻斷肺門(mén)，觀察6h；IR組左肺門(mén)過(guò)阻斷帶后阻斷肺門(mén)缺血1h，松開(kāi)阻斷帶分別再灌注1h、3h、5h；Pur組在缺血前5min靜脈給予葛根素(30mg／kg)，余同IR組。各組在缺血前、缺血m、再灌注1h、3h和5h分別抽血檢測(cè)一氧化碳血紅蛋白(COHb)濃度，環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(cGMP)含量，超氧化物歧化酶(SOD)活力，丙二醛(MDA)含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)取肺組織檢測(cè)濕干重比(W／D)，cGMP含量及HO酶活力；光鏡

3、觀察肺組織形態(tài)學(xué)改變及計(jì)算肺泡損傷率(IQA)；電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變；應(yīng)用免疫組化，原位雜交觀察HO．1表達(dá)部位及強(qiáng)度。 結(jié)果：1.IR組血漿COHb濃度、cGMP含量隨著缺血和再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高；Pur組這種上升趨勢(shì)較IR組更加明顯(P<0.01)。 2．IR組血清SOD活力隨著缺血和再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸下降；Pur組這種下降的程度較IR組顯著減緩（p<0.01)。 3．IR組、Pur組血清MD

4、A含量均隨著缺血和再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸上升，但Pur組上升較IR組緩慢(p<0.01或P<0.05)。 4．與C組相比，IR組、Put組肺組織cGMP含量、HO.1活力均顯著升高（p<0.01)，且隨著再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高；與同時(shí)間點(diǎn)IR組相比，Pur組cGMP含量、HO．1活力明顯增高(P<0.01)。 5．IR組W／D、IQA均明顯高于C組(P<0．01)，且隨著再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高；Pur組W／D、I

5、QA雖然較C組為高，但明顯低于同時(shí)間點(diǎn)IR組(P<0.01)。 6．原位雜交及免疫組化顯示C組HO-1呈陰性表達(dá)，IR組、Pur組HO-1在肺血管內(nèi)皮、部分血管平滑肌、外膜層及部分氣道上皮呈陽(yáng)性表達(dá)，且隨著再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)逐漸增強(qiáng)；而Pur組HO．1mRNA、HO．1蛋白表達(dá)明顯強(qiáng)于同時(shí)間點(diǎn)IR組（p<0．01或P<0．05)。 7．光鏡觀察：C組肺間質(zhì)及肺泡結(jié)構(gòu)保持完整，無(wú)明顯受損，未見(jiàn)明顯炎性細(xì)胞；IR組可見(jiàn)肺間

6、質(zhì)增寬水腫，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡內(nèi)可見(jiàn)較多紅細(xì)胞滲出，損傷明顯；Put組肺間質(zhì)水腫程度減輕，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少，肺泡內(nèi)紅細(xì)胞滲出減少，肺泡較完整。 8．電鏡觀察：C組肺血管、肺泡I型、II型上皮結(jié)構(gòu)正常。IR組肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)有不同程度的損害。肺血管內(nèi)皮細(xì)胞水腫，線粒體空泡化，核染色質(zhì)邊集，核固縮傾向；I型肺泡上皮細(xì)胞內(nèi)吞飲小泡較少；II型肺泡上皮細(xì)胞表面微絨毛減少，線粒體腫脹，板層小體數(shù)量減少、排空增多，胞漿濃縮，核固縮；肺泡腔內(nèi)水

7、腫、紅細(xì)胞增多，肺泡隔及毛細(xì)血管內(nèi)炎癥細(xì)胞附壁，以中性粒細(xì)胞為主。Put組肺組織損傷明顯減輕。肺血管內(nèi)皮細(xì)胞輕度腫脹，染色質(zhì)分布較均勻；I型肺泡上皮細(xì)胞內(nèi)吞飲小泡較多；II型肺泡上皮細(xì)胞表面微絨毛及板層小體增多；肺泡隔輕度水腫，毛細(xì)血管內(nèi)炎癥細(xì)胞減少。 結(jié)論： 1．肺缺血再灌注可誘導(dǎo)肺組織HO-1的表達(dá)。 2．HO．1表達(dá)上調(diào)可減輕肺缺血再灌注損傷，其機(jī)制可能是通過(guò)酶解產(chǎn)物CO激活鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶，提高環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷水平