葛根素對肺缺血再灌注損傷時細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因的干預(yù).pdf

1、目的：研究細(xì)胞凋亡和肺缺血再灌注損傷的關(guān)系及葛根素對凋亡及其相關(guān)基因的影響. 方法： 健康日本大耳白兔70只,隨機(jī)分為對照組(C組)、缺血再灌注1h(IRlh)組、3h(IR3h)組、5h(IR5h)組和缺血再灌注+葛根素lh(Purlh)組、3h(Pur3h)組、5h(Pur5h)組.麻醉后左側(cè)開胸,游離肺門,穿過阻斷帶,復(fù)制在體原位單肺缺血再灌注模型.C組左肺門過阻斷帶后不阻斷肺門,觀察6 h; IR組左肺門過阻斷帶

2、后阻斷肺門缺血1h,松開阻斷帶分別再灌注1h、3h、5h;Put組在缺血前5min靜脈給予葛根素(30mg/kg)(C組及IR組同時間點(diǎn)注射等量生理鹽水),余同IR組.實(shí)驗(yàn)結(jié)束頸動脈取血檢測血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量;取肺組織測濕/干重比(W/D);采用原位末端標(biāo)記法檢測肺組織凋亡指數(shù)(AI);免疫組織化學(xué)、原位雜交測定肺組織Bc1-2、Bax及caspase-3的表達(dá);光鏡、電鏡觀察肺組織

3、形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)變化,并測定肺損傷組織學(xué)定量評價指標(biāo)(IQA). 結(jié)果： 1.IR各組SOD活性、NO含量明顯低于C組(均P<0.01),并隨再灌注時間的延長逐漸降低;Pur各組SOD、NO均高于IR組相同時間點(diǎn)(P<0.05或P<0.01). 2.IR各組MDA、W/D及IQA隨再灌注時間延長逐漸升高,且均高于C組(均P<0.01):Pur各組與對應(yīng)時間點(diǎn)IR組相比明顯減低(均P<0.01). 3.IRlh組

4、肺組織細(xì)胞AI明顯高于C組(P<0.01),IR3h組高于IRlh組(P<0.01),但與IRSh組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.Pur各組AI均顯著低于對應(yīng)時間點(diǎn)IR組(P<0.01),其中以Pur3h組AI最高,且與Purlh及Pur5h相比,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05).凋亡細(xì)胞主要為肺泡上皮細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞. 4.IR各組肺組織Bcl-2、Bax和caspase-3的表達(dá)較C組均明顯上調(diào)(均P<0.01).陽性細(xì)胞主要分布于血管

5、內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞及支氣管上皮細(xì)胞.再灌注期間,IR組Bax和caspase-3的表達(dá)隨時間延長逐漸增`加,Pur組與IR組相同時間點(diǎn)比較表達(dá)顯著下降(P<0.01或P<0.05);IR組Bcl-2隨再灌注時間延長逐漸下降,Pur各組與IR組同一時間點(diǎn)比較其表達(dá)明顯增加(均P<0.01);IR各組Bcl-2/Bax比值較C組下降(均P<0.01),并隨再灌注時間延長更加明顯,Pur各組與IR組同一時間點(diǎn)比較有所升高(均P<0.01)

6、. 5.肺組織Bcl-2蛋白與Bcl-2mRNA、Bax蛋白與Bax mRNA、caspase-3蛋白與caspase-3mRNA及Bcl-2蛋白/Bax蛋白與Bcl-2 mRNA/Bax mRNA之間分別呈顯著正相關(guān)(r分別=0.986,0.977,0.946,0.976,均P<0.01). MDA、W/D、IQA、BaxmRNA及caspase-3 mRNA與AI呈正相關(guān)(r分別=0.769,0.756,0.878,0.84

7、1,0.837,均P<0.01);SOD、N0、Bcl-2mRNA/BaxmRNA與AI呈負(fù)相關(guān)(r分別=-0.833,-0.759,-0.772,均P<0.01).此外,肺組織Bcl-2mRNA與血清NO含量之間呈負(fù)相關(guān)(r=-0.276,P<0.05), caspase-3mRNA與Bcl-2mRNA/BaxmRNA呈負(fù)相關(guān)(r=-0.128,P<0.01). 6.光鏡檢查:C組肺間質(zhì)及肺泡結(jié)構(gòu)保持完整,無明顯受損,未見明顯

8、炎性細(xì)胞;IR組可見肺間質(zhì)增寬水腫,炎癥細(xì)胞浸潤,肺泡內(nèi)可見較多紅細(xì)胞滲出,損傷明顯;Pur組肺間質(zhì)水腫程度減輕,炎癥細(xì)胞浸潤減少,肺泡內(nèi)紅細(xì)胞滲出減少,肺泡較完整. 7.透射電鏡檢查:C組毛細(xì)血管,肺泡Ⅰ型,Ⅱ型上皮結(jié)構(gòu)正常.IR組肺內(nèi)毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹,可見核染色質(zhì)聚集并靠核膜周邊分布,胞核固縮傾向,核間隙增大;Ⅰ型肺泡上皮細(xì)胞內(nèi)吞飲小泡較少,Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞表面微絨毛減少,線粒體腫脹,板層小體稀少,出現(xiàn)較多空泡;肺泡隔水

9、腫,肺泡隔及毛細(xì)血管內(nèi)炎癥細(xì)胞附壁,以中性粒細(xì)胞為主.Pur組肺組織損傷明顯減輕,肺血管內(nèi)皮細(xì)胞輕度腫脹,染色質(zhì)分布較均勻;Ⅰ型肺泡上皮細(xì)胞內(nèi)吞飲小泡較多,Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞表面微絨毛及板層小體增多;肺泡隔輕度水腫,毛細(xì)血管內(nèi)炎癥細(xì)胞減少. 結(jié)論： 1.細(xì)胞凋亡可能在肺缺血再灌注損傷中起重要作用. 2.肺缺血再灌注時caspase-3基因表達(dá)上調(diào),Bcl-2/Bax比值下降并隨時間延長而更加顯著,可能是促進(jìn)肺缺血再