外傷后細(xì)菌性致死性肉芽腫致病菌—痤瘡丙酸桿菌培養(yǎng)上清對(duì)THP-1細(xì)胞影響的研究.pdf

1、外傷后細(xì)菌性致死性肉芽腫(FatalBacterialGranulomaafterTrauma，F(xiàn)BGT)是近年來才逐漸被認(rèn)識(shí)的一種新疾病。此病病情兇險(xiǎn)，到目前為止發(fā)現(xiàn)的20余例患者除1例尚存活外，其余均在1.5-4年內(nèi)死亡。該病臨床表現(xiàn)為面部外傷愈合后出現(xiàn)暗紅色斑塊，病理學(xué)改變?yōu)檠仔匀庋磕[。由于人們對(duì)本病尚缺少認(rèn)識(shí)，供集中研究的臨床病例少，給研究工作帶來了很大不便。經(jīng)過努力，本課題組已經(jīng)證實(shí)FBGT的病原菌為痤瘡丙酸桿菌(Propio

2、nibacteriumacnes，P.acnes)。然而，F(xiàn)BGT宿主對(duì)病原菌的免疫應(yīng)答模式及該病的發(fā)病機(jī)理均不清楚，建立一種病原菌與宿主免疫細(xì)胞之間相互作用的細(xì)胞微生物學(xué)模型可能是研究FBGT發(fā)病機(jī)理的途徑之一，希望該模型可在一定程度上有助于闡明FBGT發(fā)病的機(jī)理，為深入研究該病的發(fā)病機(jī)制打下基礎(chǔ)。在此研究中，我們著眼于病原菌與宿主固有免疫細(xì)胞——單核/巨噬細(xì)胞之間的作用，選擇不同來源的P.acnes培養(yǎng)上清與單核/巨噬細(xì)胞株THP-

3、1細(xì)胞為研究對(duì)象，建立一種病原菌與宿主之間的細(xì)胞微生物學(xué)模型，并在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步通過DAF比色法，ELISA、PCR等方法，探討宿主的單核/巨噬細(xì)胞在病原菌入侵后，在吞噬、分泌細(xì)胞因子方面的免疫學(xué)功能改變。探討FBGT的發(fā)病機(jī)制。 方法：1.P.acnes(包括FBGT患者皮損分離株和P.acnes標(biāo)準(zhǔn)株)培養(yǎng)上清與THP-1細(xì)胞間相互作用基本模型的建立： 以不同來源的P.acnes培養(yǎng)上清為作用物，按照菌株的不同、培

4、養(yǎng)上清濃度的不同分組，分別作用于THP-1細(xì)胞株，觀察比較P..acnes培養(yǎng)上清作用于THP-1細(xì)胞后，對(duì)細(xì)胞增殖的影響。 2.不同來源P.acnes培養(yǎng)上清對(duì)THP-1細(xì)胞吞噬功能及產(chǎn)生細(xì)胞因子的影響： 以不同來源的P.acnes培養(yǎng)上清為作用物，按照菌種不同分組，作用于THP-1細(xì)胞24h后，應(yīng)用DAF比色法觀察了THP-1細(xì)胞吞噬功能的改變。比較了標(biāo)準(zhǔn)株與臨床分離株之間對(duì)于THP-1細(xì)胞吞噬功能影響的差別。

5、 以不同來源的P.acnes培養(yǎng)上清為作用物，按照菌種不同分組，作用于THP-1細(xì)胞24h后，應(yīng)用RT-PCR、ELISA等方法觀察比較不同來源的P..acnes培養(yǎng)上清作用于THP-1細(xì)胞后，在蛋白水平、mRNA水平上細(xì)胞產(chǎn)生IL-12、TNF-α的差別。 結(jié)果：1.P.acnes培養(yǎng)上清對(duì)THP-1細(xì)胞增殖的影響：不同來源P.acnes培養(yǎng)上清作用于THP-1細(xì)胞后，可見THP-1細(xì)胞在12-48h期間增殖明顯，48h可使

6、細(xì)胞增殖達(dá)到高峰，和空白對(duì)照組相比，上清刺激增殖作用較明顯，并且細(xì)胞呈聚集趨勢(shì)。其中標(biāo)準(zhǔn)株表現(xiàn)出較強(qiáng)的促進(jìn)THP-1細(xì)胞增殖的作用，其它分離菌株之間對(duì)增殖的影響也略有差別，但不明顯。相同菌株上清作用于THP-1細(xì)胞后，可見THP-1細(xì)胞在12-48h期間增殖明顯，48h可使細(xì)胞增殖達(dá)到高峰，和空白對(duì)照組相比，上清刺激增殖作用較明顯。其中50％濃度時(shí)上清表現(xiàn)出較強(qiáng)的促進(jìn)THP-1細(xì)胞增殖的作用。 2.P.acnes培養(yǎng)上清對(duì)THP

7、-1細(xì)胞功能的影響：不同來源P.acnes培養(yǎng)上清作用于THP-1細(xì)胞24h后，各菌株培養(yǎng)上清均能明顯的增強(qiáng)THP-1細(xì)胞的吞噬功能，促進(jìn)作用的強(qiáng)弱與上清濃度有關(guān)。標(biāo)準(zhǔn)株在20％濃度時(shí)刺激作用最強(qiáng)，分離株均表現(xiàn)為100％濃度時(shí)促進(jìn)作用最強(qiáng)，提示標(biāo)準(zhǔn)株的促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬作用更強(qiáng)。 不同來源P.acnes培養(yǎng)上清作用于THP-1細(xì)胞24h后，各菌株上清對(duì)TNF-α、IL-12表達(dá)量均有明顯增加；分離菌株上清作用后，THP-1細(xì)胞的T

8、NF-α表達(dá)量低于標(biāo)準(zhǔn)株上清作用的細(xì)胞，而IL-12的表達(dá)量卻高于標(biāo)準(zhǔn)株。RT-PCR結(jié)果與ELISA結(jié)果相似。 結(jié)論：1.不同來源P.acnes培養(yǎng)上清作用于THP-1細(xì)胞，可刺激THP-1細(xì)胞的增殖，細(xì)胞呈聚集趨勢(shì)。不同菌株可表現(xiàn)出不同的刺激增值的能力。 2.不同來源P.acnes培養(yǎng)上清作用于THP-1細(xì)胞24h后，均可增強(qiáng)THP-1細(xì)胞吞噬功能，標(biāo)準(zhǔn)株比FBGT患者皮損分離株刺激吞噬的功能略有增強(qiáng)。 3.