SAHA對(duì)人宮頸癌細(xì)胞化放療增敏作用的研究.pdf

1、目的:觀察組蛋白去乙?；敢种苿㏒AHA(suberoylanilide hydrox amic acid)聯(lián)合順鉑或X射線照射后人宮頸癌SiHa細(xì)胞生長抑制、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞集落形成率等情況，探討SAHA對(duì)宮頸癌細(xì)胞化療和放療增敏的效果。同時(shí)檢測P21、Bax及Ku70的mRNA和蛋白的表達(dá)，探討其增敏的機(jī)制。
　　 方法:1、以SAHA0.25、0.5、1、2、4、6μmol/L和DDP1、2、4、6、8、10μg/mL分成單

2、藥組和不同濃度SAHA+DDP聯(lián)合用藥組，另設(shè)不加藥對(duì)照組，作用于體外培養(yǎng)的人宮頸癌SiHa細(xì)胞。采用MTT比色法檢測各組SiHa細(xì)胞的增殖抑制率;流式細(xì)胞術(shù)檢測各組的細(xì)胞周期;用AnnexinV-FITC標(biāo)記藥物作用后的細(xì)胞，了解其早期凋亡的情況;2、20％IC50SAHA預(yù)處理SiHa細(xì)胞24h后與不同劑量X射線(0Gy、1Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy)聯(lián)合，利用細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測照射后集落形成率，并計(jì)算細(xì)胞存活分?jǐn)?shù);根據(jù)

3、單擊多靶模型SF=1-(1-e-D/Do。)n擬合生存曲線并計(jì)算外推值，平均致死劑量和準(zhǔn)閩劑量以及放射增敏比;3、用RT-PCR法和Western blot法分析藥物作用及射線照射后宮頸癌細(xì)胞中P21、Bax和Ku70的mRNA和蛋白的表達(dá);
　　 結(jié)果:1、SAHA單藥處理細(xì)胞時(shí)，各組對(duì)SiHa細(xì)胞的生長抑制率均比對(duì)照組升高（P＜0.05）;隨著給藥時(shí)間延長，細(xì)胞的生長抑制率逐漸升高（P＜0.05）。2、SAHA與DDP聯(lián)合作

4、用SiHa細(xì)胞24h，不同劑量聯(lián)合組對(duì)細(xì)胞的抑制率均較單用DDP明顯（p＜0.05）;與1、2、4 ug/ml DDP聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，隨SAHA劑量的增大抑制率逐漸增高(P＜0.05);SAHA在劑量濃度為1、2、4μmol/L時(shí)，細(xì)胞的抑制率隨DDP濃度的增加而升高;聯(lián)用的效果Q值顯示SAHA和相對(duì)中低劑量的DDP聯(lián)合用藥表現(xiàn)為協(xié)同作用，較高劑量的DDP聯(lián)合用藥為單純相加作用。3、SAHA1、2、4μmol/L（S組）分別與DDP1、2、

5、4 ug/ml（D組）聯(lián)合（SD組）作用于SiHa細(xì)胞，與對(duì)照組比較，S組、D組及SD組G0/G1期比例明顯增加，而G2/M+S期細(xì)胞比例明顯減少，PI明顯下降（P＜0.05）;與S及D組比較，SD組G0/G1期比例明顯增加，而G2/M+S期細(xì)胞比例明顯減少，PI明顯下降（P＜0.05）;4、各聯(lián)合組早期凋亡細(xì)胞比例均較單藥組明顯升高（P＜0.05）;在2μg/ml的DDP作用SiHa細(xì)胞24h后，細(xì)胞凋亡不明顯，但經(jīng)2μmol/L S

6、AHA預(yù)處理后，細(xì)胞凋亡率顯著增加，且隨著SAHA濃度的增加，凋亡率也增加（P＜0.05）。5、Bax mRNA及蛋白在S、D組表達(dá)比較微弱，與對(duì)照組比較無差異（P＞0.05），聯(lián)合作用后BaxmRNA及蛋白的表達(dá)顯著高于其他各組（P＜0.05）;6、P21mRNA及蛋白在各組的表達(dá)均上調(diào)，以聯(lián)合組的表達(dá)上調(diào)顯著，明顯高于D組和對(duì)照組（P＜0.05）。7、SAHA聯(lián)合照射組的細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)明顯低于單獨(dú)放療組，隨放療劑量的增高，細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)

7、逐漸降低（P＜0.05）;利用多靶單擊數(shù)學(xué)模型繪制出細(xì)胞輻射存活曲線，可見聯(lián)合組曲線較單純照射組左移，且較為平直、“肩區(qū)”不明顯。單獨(dú)照射組和聯(lián)合組平均致死劑量Do分別為2.329、1.213，外推數(shù)N分別為2.761、4.770，準(zhǔn)閾劑量Dq分別為1.721、0.823。放射增敏比為1.92。8、SAHA組BaxmRNA及蛋白的表達(dá)與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，照射組明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)，SAHA聯(lián)合照射組明

8、顯高于其它各組(P＜0.05);SAHA聯(lián)合照射組細(xì)胞Ku70mRNA及蛋白的表達(dá)明顯低于照射組（P＜0.05);
　　 結(jié)論:1、SAHA在體外能夠抑制人宮頸癌SiHa細(xì)胞的生長，抑制作用呈時(shí)間劑量依賴性。2、SAHA聯(lián)合DDP作用SiHa細(xì)胞，在體外可以顯著誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并使細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期，二者具有協(xié)同作用。3、SAHA聯(lián)合DDP作用SiHa細(xì)胞，能夠顯著地上調(diào)p21、Bax的mRNA及蛋白表達(dá)水平，可見促進(jìn)細(xì)胞