SAHA對人宮頸癌細胞化放療增敏作用的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:觀察組蛋白去乙?;敢种苿㏒AHA(suberoylanilide hydrox amic acid)聯(lián)合順鉑或X射線照射后人宮頸癌SiHa細胞生長抑制、細胞凋亡、細胞集落形成率等情況,探討SAHA對宮頸癌細胞化療和放療增敏的效果。同時檢測P21、Bax及Ku70的mRNA和蛋白的表達,探討其增敏的機制。
   方法:1、以SAHA0.25、0.5、1、2、4、6μmol/L和DDP1、2、4、6、8、10μg/mL分成單

2、藥組和不同濃度SAHA+DDP聯(lián)合用藥組,另設不加藥對照組,作用于體外培養(yǎng)的人宮頸癌SiHa細胞。采用MTT比色法檢測各組SiHa細胞的增殖抑制率;流式細胞術檢測各組的細胞周期;用AnnexinV-FITC標記藥物作用后的細胞,了解其早期凋亡的情況;2、20%IC50SAHA預處理SiHa細胞24h后與不同劑量X射線(0Gy、1Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy)聯(lián)合,利用細胞克隆形成實驗檢測照射后集落形成率,并計算細胞存活分數(shù);根據(jù)

3、單擊多靶模型SF=1-(1-e-D/Do。)n擬合生存曲線并計算外推值,平均致死劑量和準閩劑量以及放射增敏比;3、用RT-PCR法和Western blot法分析藥物作用及射線照射后宮頸癌細胞中P21、Bax和Ku70的mRNA和蛋白的表達;
   結果:1、SAHA單藥處理細胞時,各組對SiHa細胞的生長抑制率均比對照組升高(P<0.05);隨著給藥時間延長,細胞的生長抑制率逐漸升高(P<0.05)。2、SAHA與DDP聯(lián)合作

4、用SiHa細胞24h,不同劑量聯(lián)合組對細胞的抑制率均較單用DDP明顯(p<0.05);與1、2、4 ug/ml DDP聯(lián)合應用時,隨SAHA劑量的增大抑制率逐漸增高(P<0.05);SAHA在劑量濃度為1、2、4μmol/L時,細胞的抑制率隨DDP濃度的增加而升高;聯(lián)用的效果Q值顯示SAHA和相對中低劑量的DDP聯(lián)合用藥表現(xiàn)為協(xié)同作用,較高劑量的DDP聯(lián)合用藥為單純相加作用。3、SAHA1、2、4μmol/L(S組)分別與DDP1、2、

5、4 ug/ml(D組)聯(lián)合(SD組)作用于SiHa細胞,與對照組比較,S組、D組及SD組G0/G1期比例明顯增加,而G2/M+S期細胞比例明顯減少,PI明顯下降(P<0.05);與S及D組比較,SD組G0/G1期比例明顯增加,而G2/M+S期細胞比例明顯減少,PI明顯下降(P<0.05);4、各聯(lián)合組早期凋亡細胞比例均較單藥組明顯升高(P<0.05);在2μg/ml的DDP作用SiHa細胞24h后,細胞凋亡不明顯,但經2μmol/L S

6、AHA預處理后,細胞凋亡率顯著增加,且隨著SAHA濃度的增加,凋亡率也增加(P<0.05)。5、Bax mRNA及蛋白在S、D組表達比較微弱,與對照組比較無差異(P>0.05),聯(lián)合作用后BaxmRNA及蛋白的表達顯著高于其他各組(P<0.05);6、P21mRNA及蛋白在各組的表達均上調,以聯(lián)合組的表達上調顯著,明顯高于D組和對照組(P<0.05)。7、SAHA聯(lián)合照射組的細胞存活分數(shù)明顯低于單獨放療組,隨放療劑量的增高,細胞存活分數(shù)

7、逐漸降低(P<0.05);利用多靶單擊數(shù)學模型繪制出細胞輻射存活曲線,可見聯(lián)合組曲線較單純照射組左移,且較為平直、“肩區(qū)”不明顯。單獨照射組和聯(lián)合組平均致死劑量Do分別為2.329、1.213,外推數(shù)N分別為2.761、4.770,準閾劑量Dq分別為1.721、0.823。放射增敏比為1.92。8、SAHA組BaxmRNA及蛋白的表達與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P<0.05),照射組明顯高于對照組(P<0.05),SAHA聯(lián)合照射組明

8、顯高于其它各組(P<0.05);SAHA聯(lián)合照射組細胞Ku70mRNA及蛋白的表達明顯低于照射組(P<0.05);
   結論:1、SAHA在體外能夠抑制人宮頸癌SiHa細胞的生長,抑制作用呈時間劑量依賴性。2、SAHA聯(lián)合DDP作用SiHa細胞,在體外可以顯著誘導細胞凋亡,并使細胞周期阻滯于G0/G1期,二者具有協(xié)同作用。3、SAHA聯(lián)合DDP作用SiHa細胞,能夠顯著地上調p21、Bax的mRNA及蛋白表達水平,可見促進細胞

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