積雪草對TGF-β1誘導的體外培養(yǎng)的腎小管上皮細胞MMP-2、TIMP-2表達的實驗研究.pdf

1、　　背景：腎小管間質(zhì)纖維化(renal tubuleinterstitial fibrosis,TIF)是多種原因引起的腎臟疾病進展至終末期腎病(end-stage renal disease,ESRD)的共同途徑和主要病理特征。目前認為,TIF 的主要特征是細胞外基質(zhì)(extracelluar matirx,ECM)的合成增加而降解減少,導致 ECM 的大量積聚。在某些病理條件下,腎小管上皮細胞(renal tubuleinterst

2、itial cells,RTECs)可丟失細胞表面標志物而表現(xiàn)為肌成纖維細胞(myofibroblast, MyoF)的表型,即發(fā)生腎小管上皮細胞-肌成纖維細胞轉(zhuǎn)分化(tubular epithelial to mesenchymal transdifferentiation,TEMT)。研究表明,MyoF可合成大量ECM,導致ECM積聚。而MMP-2/TIMP-2系統(tǒng)在ECM降解過程中發(fā)揮著重要作用。
　　目的：本實驗研究積

3、雪草顆粒對 TGF-β1 誘導的體外培養(yǎng)的腎小管上皮細胞MMP-2、TIMP-2mRNA及蛋白表達的影響,研究積雪草防治TIF的可能機制,為臨床上應用積雪草防治TIF提供理論依據(jù)。
　　方法：以福辛普利(蒙諾)為陽性對照,將體外培養(yǎng)的大鼠近端腎小管上皮細胞(NRK52E)隨機分為6組：①正常對照組；②TGF-β1誘導組；③TGF-β1+積雪草小劑量組；④TGF-β1+積雪草中劑量組；⑤TGF-β1+積雪草大劑量組；⑥TGF-β

4、1+蒙諾組。培養(yǎng)48h后取出,應用實時熒光定量PCR(realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR)技術(shù)和western-blot技術(shù)檢測細胞MMP-2、TIMP-2的mRNA及蛋白表達。每組實驗重復三次。
　　結(jié)果：①與正常對照組相比,TGF-β1誘導組細胞由鋪路石樣上皮細胞向梭形肌成纖維細胞轉(zhuǎn)變,積雪草大劑量組細胞形態(tài)變化不明顯,蒙諾組細胞形態(tài)變化與積雪草大劑量組相似。與正

5、常對照組相比,TGF-β1 誘導組 MMP-2、TIMP-2 的mRNA表達明顯升高(p<0.05)；積雪草大劑量組和蒙諾組細胞MMP-2、TIMP-2的mRNA與TGF-β1誘導組相比明顯下降(p<0.05),蒙諾組細胞變化與積雪草大劑量組相似；②與正常對照組相比,TGF-β1誘導組MMP-2、TIMP-2的蛋白表達明顯升高(p<0.05)；積雪草大劑量組和蒙諾組細胞 MMP-2、TIMP-2 的蛋白表達與TGF-β1誘導組相比明顯下