瘦素對人腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化和TGF-β1表達的影響.pdf

1、目的:通過觀察瘦素(leptin)對人近端腎小管上皮細胞(HK-2)轉(zhuǎn)分化的作用,探討其與轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)表達的關(guān)系及糖尿病腎臟病腎間質(zhì)纖維化的發(fā)病機制。
　　 方法:分別用不同濃度的瘦素(10、50、100ng/ml)刺激體外培養(yǎng)的HK-2細胞48 h,以及100ng/ml的瘦素刺激不同的時間(24、48、72 h)。倒置顯微鏡下觀察HK-2細胞形態(tài)學變化;實時熒光定量RT-PCR法檢測細胞a-平滑肌肌動蛋白

2、(a-smoothmuscle actin,a-SMA)、E-鈣粘蛋白(E-cadherin)并TGF-β1 mRNA的表達水平;Western印跡法檢測細胞內(nèi)a-SMA、E-cadherin、FN的蛋白表達水平;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測細胞培養(yǎng)液上清中TGF-β1蛋白表達量。抗TGF-β1抗體中和實驗分析瘦素對HK-2細胞轉(zhuǎn)分化的作用與TGF-β1的關(guān)系。
　　 結(jié)果:(1)瘦素刺激可使HK-2細胞逐漸由橢圓形變成長梭

3、形,類似肌成纖維細胞的形態(tài);(2)RT-PCR、Western印跡法及ELISA結(jié)果表明,瘦素可以下調(diào)E-cadherin的表達,同時上調(diào)a-SMA、TGF-β1的表達,其作用有一定的劑量及時間依賴性,且a-SMA與TGF-β1mRNA表達量之間呈正相關(guān)。(3)抗TGF-β1抗體中和實驗結(jié)果表明,抗TGF-β1抗體能夠顯著降低瘦素導致的HK-2細胞表達a-SMA蛋白,同時阻止瘦素降低E-cadherin表達及增加FN合成的作用。