草酸鈣對體外培養(yǎng)犬腎小管上皮細(xì)胞的作用.pdf

1、尿石癥是犬貓常見的泌尿道疾病。近20年來，犬草酸鈣尿結(jié)石的發(fā)病率已超過了磷酸銨鎂結(jié)石成為最常見的犬尿結(jié)石病類型。其成因多樣，與飲食和品種均有關(guān)系。隨著對人類草酸鈣尿結(jié)石的研究不斷深入，研究人員在草酸鈣尿結(jié)石成因的研究方面出現(xiàn)了大量理論和實踐成果。本論文根據(jù)已被廣泛認(rèn)同的草酸鈣結(jié)石形成理論：結(jié)石形成需要經(jīng)過礦物成核、生長、聚集、礦物與腎小管上皮細(xì)胞的粘附四個過程，設(shè)計了本實驗，以探討犬草酸鈣尿結(jié)石形成過程中草酸鈣對犬腎小管上皮細(xì)胞的作用。

2、
　　本研究通過體外傳代培養(yǎng)犬腎小管上皮細(xì)胞（MDCK細(xì)胞），在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入終濃度分別為300μg/mL、600μg/mL、900μg/mL的草酸鈣，各自培養(yǎng)1h、2h、6h、12h、24h、48h，用顯微鏡觀察各作用時間下細(xì)胞在培養(yǎng)皿里的貼壁情況、細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化和草酸鈣結(jié)晶在細(xì)胞內(nèi)外的粘附和聚集情況；然后將各時間段各濃度相應(yīng)細(xì)胞樣本收集起來進(jìn)行超聲破碎，通過CCK-8法測定細(xì)胞活性；用試劑盒測定MDCK細(xì)胞內(nèi)蛋白含量、過氧化

3、氫含量、丙二醛含量、乳酸脫氫酶含量、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶活力和超氧化物歧化酶活力，測定細(xì)胞氧化損傷和抗氧化情況。將所得結(jié)果整理對比分析，探討草酸鈣刺激 MDCK細(xì)胞后，細(xì)胞活力的變化、草酸鈣結(jié)晶粘附和聚集情況以及細(xì)胞氧化損傷/抗氧化能力三者之間的關(guān)系。
　　實驗結(jié)果顯示，同一濃度作用下，MDCK細(xì)胞活力和細(xì)胞SOD活性都隨草酸鈣作用時間延長而下降，而細(xì)胞受氧化損傷程度隨實驗延長而加深，草酸鈣結(jié)晶在細(xì)胞內(nèi)外粘附和聚集增多；在同一作用時間

4、下，草酸鈣濃度越高，MDCK細(xì)胞活力和細(xì)胞SOD活性越低，細(xì)胞受氧化損傷及草酸鈣的粘附和聚集越嚴(yán)重。
　　由此得到結(jié)論：草酸鈣對犬腎小管上皮細(xì)胞具有細(xì)胞毒性，其中包括草酸鈣能引起細(xì)胞產(chǎn)生有害氧自由基而發(fā)生氧化損傷。此過程中，草酸鈣結(jié)晶開始粘附和聚集，而且隨著細(xì)胞損傷加劇和細(xì)胞碎片增多，結(jié)晶粘附和聚集更快更多。因此，草酸鈣在犬尿液中濃度越高，含草酸鈣尿液在腎臟中時間越長，越容易導(dǎo)致犬腎臟出現(xiàn)損傷并加劇草酸鈣結(jié)晶粘附，促進(jìn)犬草酸鈣結(jié)石